HƠm l ng tannin có trong m u đ c tính theo cơng th c sau:
TTE TAE mV
Trong đóμ TTE (mg/mL)μ hƠm l ng tannin tính trên m t gam cao khơ. V (L): th tích m u.
m (g): kh i l ng m u.
TAE (mg TAE/g cao khô)μ hƠm l ng c l ng c a tannin suy ra t đ ng chu n tannic acid.
2.3.8. Ph ngăphápăđánhăgiáăho t tính c ch enzyme tyrosinase a) Nguyên t c
Khi có m t enzyme tyrosinase, L-Dopa s b oxy hóa thƠnh dopachrome có mƠu đ cam, b c sóng h p thu c c đ i t i 475 nm. Khi có m t ch t c ch tyrosinase, l ng dopachrome sinh ra s gi m xu ng, do đó mƠu đ cam c ng s gi m xu ng, vi c nƠy ph thu c vƠo n ng đ th c a m u. Ti n hƠnh đo đ h p thu b c sóng
475 nm đ xác đ nh ph n tr m c ch enzyme tyrosinase c a m u theo n ng đ . Kojic acid đ c dùng lƠm ch t đ i chi u. So sánh giá tr IC50 c a m u vƠ kojic acid đ đánh giá kh n ng c ch enzyme tyrosinase.
y = 0.0006x - 0.0201 R² = 0.992 0.0 0.1 0.2 0.3 0.4 0.5 0.6 0.7 0 200 400 600 800 1000 1200 h p thu N ng đ (mg/mL)
39
b)ăPh ngăphápăti năhƠnh
Ph ng pháp đánh giá ho t tính c ch enzyme tyrosinase đ c th c hi n theo ph ng pháp đ c đ a ra b i Masuda et al. n m 2005 [86, 87].
ki m tra ho t tính c ch enzyme tyrosinase, đ u tiên c n kh o sát n ng đ
c a các m u cao tan trong DMSO 5%. K t qu th c nghi m cho th y c sáu đ i t ng nghiên c u là i, tía tơ và ng i c u đ u tan trong DMSO 5% 1000 µg/mL. Vì v y trong khn kh đ tài s ti n hành kh o sát ho t tính c a các đ i t ng n ng đ
1000 µg/mL.
Chu n b μ enzyme tyrosinase 138 U/mL vƠ c ch t L-Dopa 2.5 mM hòa tan trong đ m phosphate 0.1 M (pH = 6.8). M u đo vƠ ch t chu n hòa tan trong DMSO 5% thƠnh các n ng đ khác nhau.
o m uμ 40 µL tyrosinase, 40 µL m u t o thƠnh h n h p dung d ch m u có
enzyme.
o dung d ch m u khơng có enzymeμ 40 µL tyrosinase thay b ng 40 µL đ m
phosphate.
Th c hi n t ng t v i dung d ch m u tr ng có vƠ khơng có enzyme, m u tr ng thì 40µL m u thay b ng 40 µL DMSO 5%.
Sau đó thêm vƠo 100 µL dung d ch L-dopa, 25oC trong 5 phút. S gi m mƠu c a dopachrome đ c đo 475 nm.
o ch t chu n kojic acidμ th c hi n quy trình nh trên t i các n ng đ 3, 5, 7,
40