CHƯƠNG 2 ĐỐI TƯỢNG VÀ PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU
2.1. Đối tượng, nguyên vật liệu và thiết bị
2.1.1. Đối tượng nghiên cứu
2.1.1.1. Thông tin về chế phẩm
Chế phẩm viên nang chứa thổ phục linh, hy thiêm và một số dược liệu khác do Công ty cổ phần Khoa học kỹ thuật bách khoa sản xuất với số công bố 7/2017/0106400103-CBPH (Phụ lục 1).
Chế phẩm nghiên cứu được dùng với tên mã hóa là NC.
Thành phần: Mỗi viên NC có chứa 500mg cao khơ tương ứng với các cao dược liệu sau:
• Thổ phục linh: 100 mg; • Hy thiêm: 120 mg;
• Ngồi ra cịn có một số dược liệu khác gồm: Bồ công anh, nhọ nồi, vỏ đậu xanh (với hàm lượng trong bản thông tin chi tiết về sản phẩm tại Phụ lục 2).
Dạng bào chế: viên nang cứng, khối lượng trung bình viên 500 mg/viên. Quy cách đóng gói: hộp 60 viên.
2.1.1.2. Mức liều thử chế phẩm
Liều mẫu thử NC được xây dựng dựa trên liều của các dược liệu thổ phục linh, hy thiêm đã được cơng bố có tác dụng trên thực nghiệm và liều của viên nang cứng chứa thổ phục linh, hy thiêm đã được nhóm nghiên cứu thực hiện trước đó [13].
Các mức liều thử trong nghiên cứu này cụ thể như sau: • Liều trên chuột nhắt trắng:
- Liều thử 1: chuột nhắt trắng được uống chế phẩm NC với liều 600 mg/kg. - Liều thử 2: chuột nhắt trắng được uống chế phẩm NC với liều 1200 mg/kg. • Liều trên chuột cống trắng:
- Liều thử 1: chuột cống trắng được uống chế phẩm NC với liều 330 mg/kg (tương đương liều 600 mg/kg trên chuột nhắt, sử dụng phương pháp ngoại suy liều giữa các lồi động vật thí nghiệm).
- Liều thử 2: chuột cống trắng được uống chế phẩm NC với liều 660 mg/kg (tương đương liều 1200 mg/kg trên chuột nhắt, sử dụng phương pháp ngoại suy liều giữa các lồi động vật thí nghiệm).
2.1.2. Động vật thí nghiệm
Chuột cống trắng chủng Wistar, cả hai giống (đực và cái), cân nặng 150 - 200 g, khỏe mạnh, do Viện Vệ sinh dịch tễ Trung ương cung cấp.
thực hiện nghiên cứu tại phịng ni động vật thí nghiệm của bộ mơn Dược lực, trường Đại học Dược Hà Nội và sử dụng thức ăn tiêu chuẩn do Viện Vệ sinh dịch tễ Trung ương cung cấp, uống nước tự do.
2.1.3. Hóa chất, thuốc thử
• Allopurinol (Zyloric, Aspen Pharma), LOT: A880942, HSD: 06/2023
• Bộ hóa chất định lượng acid uric (BioSystem) gồm hóa chất phản ứng, LOT: 223XA, HSD: 31/3/2022 và acid uric chuẩn, LOT: 081XB, HSD: 31/3/2022. • Carrageenan (Sigma Aldrich – Pcode: 1001606651).
• Diclofenac (Voltaren, Novartis), LOT: KDY28, HSD: 31/10/2023.
• Hóa chất pha đệm Na2HPO4.2H2O, KH2PO4, HCl, NaOH (Sigma Aldrich). • Kalioxonat (Sigma Aldrich).
• Xanthin ≥ 99% (Sigma Aldrich).
• Các hóa chất và thuốc thử khác đạt chuẩn nghiên cứu
2.1.4. Thiết bị nghiên cứu
- Cân phân tích (AND-GR200, Nhật).
- Cân kỹ thuật (Precisa-BJ610C, TE 412, Sartorius). - Đĩa UV 96 giếng đáy phẳng Costar 3635 (Corning, Mỹ).
- Hệ thống máy ELISA bao gồm máy đọc khay vi tinh thể (Biotek, Hoa Kỳ) và máy ủ lắc khay (Awareness, Hoa Kỳ).
- Máy đo pH (Eutech).
- Máy ly tâm EBA 20 (Hettich Zentrifugen, Đức). - Máy ly tâm lạnh (Centrifuge 5702R, Mỹ).
- Máy nghiền dịch đồng thể (Wisestir HS-30E, Mỹ). - Máy sinh hóa TC - 3300 Plus (Teco Diagnostics USA).
- Thiết bị đo độ phù chân chuột Plethysmometer LE 7500 (Letica Scientific Instruments).
- Tủ ấm điều nhiệt (Memmert).
- Máy móc và các dụng cụ khác thuộc phịng thí nghiệm bộ môn Dược lực Trường Đại học Dược Hà Nội.
2.1.5. Nội dung nghiên cứu
Để giải quyết 3 mục tiêu đã đề ra, nghiên cứu gồm 3 nội dung:
Nội dung 1: Đánh giá tác dụng hạ acid uric của NC trên mơ hình gây tăng acid
uric cấp bằng kalioxonat
- Đánh giá ảnh hưởng của chế phẩm nghiên cứu đến nồng độ acid uric huyết thanh trên mơ hình gây tăng acid uric cấp bằng kalioxonat
xanthin oxidase gan chuột thí nghiệm.
Nội dung 2: Đánh giá tác dụng chống viêm cấp của NC trên mơ hình thực
nghiệm:
- Đánh giá tác dụng chống viêm cấp của NC trên mơ hình gây phù bàn chân chuột bằng carrageenan.
- Đánh giá tác dụng chống viêm cấp của NC trên mơ hình gây viêm màng hoạt dịch khớp gối bằng tinh thể natri urat.
Nội dung 3: Đánh giá độc tính cấp và độc tính bán trường diễn của NC.
Hình 2.1. Sơ đồ thiết kế nội dung nghiên cứu
Viên nang NC Đánh giá tác dụng hạ acid uric
Mơ hình gây viêm màng hoạt dịch khớp gối bằng tinh thể
natri urat
Mơ hình gây phù bàn chân chuột bằng carrageenan Đánh giá tác dụng chống viêm cấp Đánh giá độc tính tiền lâm sàng Độc tính cấp Độc tính bán trường diễn 28 ngày Mục tiêu 1 Mục tiêu 2 Mục tiêu 3
Mơ hình gây tăng acid uric cấp bằng kalioxalat
Mơ hình đánh giá ảnh hưởng