Phương pháp thông thường chuyển nhân của tế bào cho vào tế bào trứng là dung hợp màng hai tế bào trên.
- Ba kĩ thuật phổ biến:kích thích xung điện, xử lí hoá chất( polyethylene –PEG), dùng virus Sendai.
- Thành phần môi trường dung hợp thường gồm: 0,3M mannitol, 0,1mM MgSO4 và 0,05 mM CaCl2.
• Cần lưu ý các thông số lí hoá( nhiệt độ, áp suất thẩm thấu, độ keo....).
• Mg cần thiết giúp duy trì tốt sự tiếp xúc màng giữa hai tế bào, bổ sung các đại phân tử để trứng không dính vào dụng cụ, có thể bổ sung thêm hệ thống đệm .
• Cặp trứng- tế bào được đặt vào môi trường nhược trương nhẹ, nồng độ ion thấp giữa hai điện cực song song.
• Phát xung điện một chiều với điện áp cao thích hợp sẽ làm vỡ cấu trúc phospholipide trên màng, do đó tạo ra những lỗ hổng.
• Trong quá trình hàn gắn, các màng sẽ dung hợp với nhau.
• Điện áp quá cao và thời gian dài sẽ làm li giải tế bào, nhưng điện áp thấp và thời gian ngắn, khó dung hợp.
- Cũng có thể vi tiêm tế bào cho nhân vào bên dưới màng ZP, cạnh với màng của cytoplast rồi dung hợp chúng bằng xung điện.
• Thông tin di truyền từ tế bào cho sẽ đi vào cytoplast.
• Thông thường , ngay sau đó tế bào khởi động hiện tượng “ tái thiết lập chương trình” nhờ sự tương tác giữa các nhân tố bên trong cytoplast với NST của tế bào cho.
- Dung hợp bằng virus Sendai đã bị bất hoạt thường cho hiệu quả thấp nên ít được sử dụng. Nếu sử dụng kết hợp giữa xung điện và virus Sendai thì kết quả cao hơn.
- Sau khi dung hợp, tiến hành hoạt hoá trứng và nuôi phôi.
Chuyển nhân được hỗ trợ xung điện: Wakayama và cs( 1998) ,là những người đầu tiên sử
dụng xung điện để hỗ trợ chuyển nhân.
- Trứng được loại bỏ nhân bằng 1 pipette khác có gắn với bộ phận khoan điện.
- NST kì giữa và thể cực thứ nhất được hút vào pipette để loại bỏ .
- Sau đó ủ vỏ trứng với môi trường có chứa sẵn 5 µg/ml Cytochalasin B trong 15-30 phút, vỏ trứng sẽ lắng xuống đáy giọt môi trường.
- Chuyển nhân tế bào sinh dưỡng vào giọt môi trường đã chứa sẵn vỏ trứng trên
- Vỏ trứng được định vị sao cho pipette chuyển nhân đi vào cùng lỗ đã được tạo ra trước đó hoặc lỗ khác trên màng zona khi loại bỏ nhân của trứng.
Một dạng biến đổi khác của kĩ thuật này là chuyển tế bào vào trứng trước khi loại nhân; sau đó hút nhân nội sinh ra khỏi tế bào.
Ngoài các phương pháp nói trên , có thể sử dụng kĩ thuật vi tiêm để tiêm trực tiếp đưa nhân của tế bào cho vào cytoplast mà không cần tạo lỗ trước.
- Tế bào sinh dưỡng được đặt trong môi trường 10% PVP.
- Màng của chúng rất yếu so với màng tế bào trứng, do đó có thể phá vỡ bằng cách dùng pipette hút vào , đẩy ra liên tiếp nhiều lần.
Việc làm trên tạo lực cơ học mạnh khiến màng sinh chất tổn thương, lỏng lẻo và dễ vỡ, giải phóng nhân. Hút và thu nhận nhân 2n.
- Một kĩ thuật mới bỏ qua bước dung hợp hay tách nhân tế bào cho, được đưa ra bởi Jang- Won Lee( 2003): sử dụng tế bào cho nguyên vẹn, để tiêm thẳng vào trứng nhận đã loại nhân.
• Quy trình này được áp dụng để tạo dòng heo với nhân cho là cumulus và thu được tỉ lệ thành công cao:
o Thu nhận các tế bào cumulus , li tâm ở tốc độ cao 800g trong 5 phút để rửa sạch môi trừơng và làm cô đặc.
o Huyền phù cặn bằng môi trường thao tác và đặt các tế bào vào giọt thao tác chứa trứng đã loại nhân.
o Tiến hành chuyển tế bào (dưới kính hiển vi ở độ phóng đại x200).
o Trước khi đâm thủng màng ZP , tế bào cần được định vị gần với đầu pipette để làm giảm lượng môi trường đưa vào trứng.
o Tế bào được chuyển vào khoang trứng.