(1)Tạo scaffold van tim 3 lá có thể hấp thu sinh học:
Phủ một lớp mỏng poly 4-hydroxylbutyrate (P4HB) trên lưới PGA bằng cách ngâm PGA trong dung dịch tetrahydrofuran.
Sau đó cho dung môi bay hơi. P4HB là một polymer sinh học có thể hấp thu, có thể tạo ra bất kì hình dạng nào và phân hủy sau 4-6 tuần.
Từ scaffold PAG/P4HB, tạo scaffold van tim 3 lá bằng nhiệt => làm lạnh và khử trùng bằng khí etylen oxide.
(2) Phân lập tế bào và nuôi cấy:
Các tế bào nên được thu nhận từ 10-15 ml tủy xương chậu của người và huyền phù trong 20ml môi trường DMEM có thêm 10% huyết thanh thai bò, kháng sinh penicillin, stryptomicine và 1000u heparin.
Li tâm dich tế bào 1500 vòng/phút trong 10 phút.
Thu phân đoạn bề mặt và nuôi cấy tiếp tục. Tế bào không bám dính, tăng trưởng và trải rộng.
Thay môi trường sau 24h, 72h, mỗi 6 ngày sau đó.
Cấy chuyển và nuôi cấy sau đó trong tủ ấm ở 370C, 5% CO2. Sau 21-28 ngày, số lượng tế bào đã đủ để cấy trên scaffold.
Các tế bào nền của tủy xương người được cấy trên scaffold van tim 3 lá và nuôi trong môi trường DMEM suốt 7 ngày trong lò phản ứng bioreactor, hoặc có thể nuôi tĩnh.
Thay môi trường sau 4 ngày. Sau 14 ngày nuôi, các tế bào đã tiết ra protein ngoại bào đặc trưng của mô van tim: collagen I, III và glycosaminoglycans.
Câu8: Nuôi cấy tế bào động vật trong bình khuấy
1. Đặc điểm
Nuôi cấy tế bào động vật với quy mô lớn đã được thử nghiệm từ đầu những năm 1950 bằng cách dung Jar Fermentor. Nhưng tế bào động vật có một số đặc điểm không có lợi trong việc nuôi quy mô lớn như:
(1) Tế bào động vật khá lớn ( khoảng 10 µm); tính bền cơ học yếu.
(2) Thời gian tăng sinh chậm gấp đôi ( khoảng 1 ngày); nhạy cảm với ion kim loại. (3) Kém khả năng thích ứng với môi trường. CCần huyết thanh và hormone. (4) Đa số tế bào động vật cần sống và phân chia trên 1 giá đỡ.