CHƯƠNG III : KẾT QUẢ VÀ THẢO LUẬN
3.2.5Xác định cơng thức hóa học của hợp chất WA4: (+)-pinoresinol-4-O-
3.2 Phân lập chất
3.2.5Xác định cơng thức hóa học của hợp chất WA4: (+)-pinoresinol-4-O-
Hợp chất WA4 thu được khi tinh chế phân đoạn F2.3, là chất bột màu vàng. Phổ khối phân giải cao HR-ESI-MS ion âm cho peak ion giả phân tử tại m/z =
437.1027 [M-H]- (khối lượng tính tốn 437.1012, C20H21O9S). Kết hợp dữ liệu phổ NMR công thức phân tử của hợp chất WA4 được xác định là C20H22O9S.
Trang 57
Hình 36. Phổ HR-ESI-MS (negative) của hợp chất WA4
Hình 37. Phổ DEPT (125MHz, DMSO- d6) của hợp chất WA4
Trang 58
Phổ 13C-NMR và DEPT kết hợp với phổ HSQC của hợp chất WA4 cho thấy tín hiệu của 20 carbon bao gồm 12 tín hiệu carbon thơm tại δC từ 132.1 – 150.4 ppm, hai tín hiệu carbon của hai nhóm methoxyl –OCH3 tại δC 55.5 ppm (3-OCH3) và 55.6 ppm (3’-OCH3), hai tín hiệu carbon của hai nhóm oxymethylene –CH2O- tại 71.0 ppm (C-9) và 70.9 ppm (C-9’), hai tín hiệu carbon của hai nhóm oxymethine –CHO- tại δC 85.2 ppm (C-7’) và 84.9 ppm (C-7); hai tín hiệu carbon của hai nhóm methine CH tại δC 53.5 ppm (C-8’) và 53.7 ppm (C-8).
Hình 38. Phổ 1H-NMR (500MHz, DMSO- d6) của hợp chất WA4
Phổ 1H-NMR của hợp chất WA4 chỉ ra các tín hiệu proton đặc trưng cho hai hệ
spin ABX của vòng thơm bao gồm hệ spin tại δH 7.40 (1H, d, J = 8.0, H-5), 6.82 (1H,
dd, J = 1.5, 8.0, H-6), 6.92 (1H, d, J = 1.5, H-2) và hệ spin thứ hai tại δH 6.72 (1H, d,
J = 8.0, H-5’), 6.76 (1H, dd, J = 1.5, 8.0, H-6’), 6.89 (1H, d, J = 1.5, H-2’), kết hợp
với dữ liệu phổ 13C-NMR có thể dự đốn rằng phân tử hợp chất WA4 có chứa hai vịng benzene ba lần thế, gợi ý các vị trí thế lần lượt tại C-1, C-3, C-4 và C-1’, C-3’, C-4’. Bên cạnh đó phổ 1H-NMR của WA4 cịn chỉ ra các tín hiệu proton của hai nhóm
Trang 59
oxymethylene –OCH2- tại δH 4.14 (2H, m, H-9a, H-9’a) và δH 3.74 (2H, m, H-9b, H- 9’b); 2 proton của hai nhóm oxymethine –OCH- tại δH 4.67 (1H, d, J = 4.5, H-7) và
δH 4.60 (1H, d, J = 4.5, H-7’); 2 proton của hai nhóm –CH- tại δH 3.05 (2H, m, H-8, H-8’). Các dữ liệu phổ 1H và 13C NMR gợi ý hợp chất WA4 là một furofuran lignan. Các tương quan trên phổ 1H-1H COSY và HMBC đã khẳng định WA4 là 1
furofuran lignan. Cụ thể, trên phổ 1H-1H COSY của WA4 chỉ ra các mối tương tác giữa các proton H-8/H2-9/H-7 và giữa H-8’/H2-9’/H-7’.
Hình 39. Phổ 1H-1H COSY của hợp chất WA4
H8’/H7’ H8,8’/H9’b, H9b
H8,8’/H9’a, H9a
Trang 60
Hình 40. Tương quan (H C) HMBC của hợp chất WA4
H7’/C6’ H7/C6 H7’/C2’ H7/C2 4’-OH/C5’ H5’/C1’ 3-OCH3/C3 3’-OCH3/C3’ 4’-OH/C3’ 4’-OH/C4’ H5/C1
Trang 61
Hình 41. Tương quan (H C) HMBC của hợp chất WA4
Phổ HMBC cho thấy tương tác giữa H-7’ (δH 4.60) với C-8, C-9’,C-2’, C-6’; H-9’ với C-7, C-8, C-8’; H-7 với C-9, C-8’, C-2, C-6 và giữa H-9 với C-7’.
H7/C8’ H7’/C8 H7’/C9’ H7/C9 H9/C7’ H9’/C7
Trang 62
Hai nhóm methoxy được xác định gắn vào vị trí C-3 và C-3’ của khung furofuran lignan thông qua các tương tác giữa các proton của nhóm methoxy tại δH 3.76 (3H, s) với C-3’ (δC 147.5), và δH 3.74 (3H, s) với C-3 (δC 150.4); Nhóm OH được gắn vào vị
trí C-4’ thơng qua tương quan giữa proton nhóm hydroxy tại δH 8.87 (1H, s, 4’-OH) với C-3’, C-4’, và C-5’. Nhóm thế cịn lại tại vị trí C-4 được xác định là nhóm sulfate (-OSO3H).
Phân tích chi tiết số liệu phổ MS và NMR của hợp chất WA4 kết hợp so sánh với sô liệu phổ của (+)-pinoresinol-4-O-sulfate trong tài liệu tham khảo [2] cho thấy hoàn toàn tương đồng. Như vậy, hợp chất WA4 được xác định là một furofuran lignan có tên (+)-pinoresinol-4-O-sulfate. Hợp chất này được phân lập trước đây từ loài
Frankenia thymifolia Desf và đây là lần đầu tiên (+)-pinoresinol-4-O-sulfate được
phân lập từ loài A. aureum.
C20H22O9S
a
b
Hình 42. Cấu trúc (a) và một số tương quan 1H-1H COSY và HMBC (b) của WA4 Tương tác 1H-1H COSY
Trang 63
Bảng 6. Dữ liệu phổ 1H (500 MHz), 13C-NMR (125 MHz) của hợp chất WA4 và
(+)-pinoresinol-4-O-sulfate [2] dung mơi đo DMSO-d6
Vị trí C WA4 (+)- pinoresinol-4-O- sulfate [2] δC (ppm) δH (ppm) δC (ppm) 1 136.5 - 136.6 2 110.5 6.92 (1H, d, J = 1.5 Hz) 110.4 3 150.4 - 150.5 4 141.9 - 141.9 5 120.7 7.40 (1H, d, J = 8.0 Hz) 120.8 6 117.5 6.82 (1H, dd, J = 1.5, 8.0 Hz) 117.5 7 84.9 4.67 (1H, d, J = 4.5 Hz) 84.9 8 53.7 3.05 (1H, m) 53.5 9 71.0 4.14 (1H, m, H-9a) 3.74 (1H, m, H-9b) 71.0 1’ 132.1 - 132.1 2’ 110.4 6.89 (1H, d, J = 1.5 Hz) 110.4 3’ 147.5 - 147.5 4’ 145.8 - 145.9 5’ 115.1 6.72 (1H, d, J = 8.0 Hz) 115.1 6’ 118.6 6.76 (1H, dd, J = 1.5, 8.0 Hz) 118.7 7’ 85.2 4.60 (1H, d, J = 4.5 Hz) 85.2 8’ 53.5 3.05 (1H, m) 53.8 9’ 70.9 4.14 (1H, m, H-9’a) 3.74 (1H, m, H-9’b) 71.0 3’-OCH3 55.6 3.76 (3H, s) 55.6 3-OCH3 55.5 δH 3.74 (3H, s) 55.7 4’-OH 8.87 (1H, s)