Quá trình nhân giống, lên men thu sinh khối và làm khô sinh khối nấm men
S.carlsbergensis dựa theo quy trình sản xuất sinh khối vi sinh của viện Vaccine Nha Trang.
Thuyết minh quy trình:
Chuẩn bị MTTN: phaMTTN được lựa chọn và bổ sung các chất dinh dưỡng, đem phân đều vào các bình tam giác đã sấy khô ở 1600C/ 2giờ, rồi môi trường dịch
Hoạt hóa S.carlsbergensis
Chuẩn bị MTTN
Nhân giống cấp I (MTTN, thời gian, nhiệt độ nghiên cứu, tốc độ lắc 220 vòng/phút)
Nhân giống cấp III (MTTN, thời gian, nhiệt độ nghiên cứu, tốc độ lắc 220 vòng/phút)
Ly tâm dịch nuôi
Nhân giống cấp II (MTTN, thời gian, nhiệt độ nghiên cứu, tốc độ lắc 220 vòng/phút)
Sinh khối Lactose: 15%
Ủ - Thời gian: 24h - Nhiệt độ: 280C
Sấy
Men khô Men khô
700C, 48h 400C, 48h
lỏng được khử trùng ở 1atm, 1210C trong 20 phút rồi để nguội chuẩn bị cho nuôi cấy S.carlsbergensis.
Hoạt hóa S.carlsbergensis: S.carlsbergensis dùng cho nghiên cứu được bảo quản lạnh trên môi trường Hansen thạch nghiêng. Khi sử dụng được hoạt hóa bằng cách đem cấy chuyền sang môi trường thạch nghiêng, đặt trong tủấm 250C sau 24 ÷ 48 giờ.
Nhân giống cấp I: cấy S.carlsbergensis từống giống vào bình tam giác 100ml chứa 10ml dịch MTTN đã nghiên cứu ra, rồi để vào máy lắc, lắc ở tốc độ lắc 220 vòng/phút ở thời gian và nhiệt độđã nghiên cứu.
Nhân giống cấp II: các giống cấp I đã phát triển tốt được chuyền sang MTTN dạng dịch đựng trong bình tam giác 250ml với tỷ lệ 10% giống, điều kiện nhân giống như trên.
Nhân giống cấp III: được nhân từ giống cấp II với tỷ lệ giống 10%, điều kiện nhân giống như trên. Giống cấp III được dùng để nuôi cấy thu sinh khối.
Ly tâm dịch nuôi: sinh khối sau khi nuôi cấy xong thu hồi bằng cách ly tâm với tốc độ 3000 vòng/phút ở 20 phút loại bỏ phần nước lấy phần sinh khối.
Sinh khối: sinh khối thu được sau khi ly tâm bổ sung đường lactose 15%.
Ủ: khoảng 24h, nhiệt độ 280C.
Sấy:ta sấy ở 2 nhiệt độ sấy khác nhau để tạo men khô:
Men khô sấy ở tủ sấy chân không áp suất 0.8at, nhiệt độ 400C, thời gian 48 giờ.
Men khô sấy ở tủ sấy chân không áp suất 0.8at, nhiệt độ 700C, thời gian khoảng 48 giờ.