* Xác định mật độ quang – OD
Đểđánh giá tốc độ phát triển của vi khuẩn trên môi trường nuôi cấy, có thểđo sự tăng sinh khối thông qua giá trị mật độ quang OD (Optical Density). Giá trị mật độ quang OD càng cao thì chứng tỏ khả năng tăng sinh của vi sinh vật càng tốt. Các thí nghiệm đo ở bước sóng 620nm (OD620nm).
Cách đo mật độ quang: lấy dịch sau nuôi cấy đem ly tâm, sau đó lấy phần sinh khối thu được đem pha loãng với nước cất với thể tích bằng thể tích của phần dịch trong bỏ đi sau ly tâm. Rồi tiến hành đo mật độ quang ở bước sóng 620nm. Mẫu đối chứng (mẫu trắng) là nước cất.
* Phương pháp xác định số lượng tế bào (CFU) [8]
Tiến hành: dùng micropipet vô trùng hút 1ml dịch nuôi cấy cho vào ống nghiệm chứa 9ml nước muối sinh lý 0.85%. Sau đó được pha loãng với mỗi nồng độ kế tiếp giảm 10 lần. Sau đó cấy gạt 0.1ml dịch pha loãng trên đĩa thạch môi trường, cho tủ ấm 250C, sau 2 ÷ 3 ngày đếm số lượng khuẩn lạc mọc trên đĩa Peptri.
Công thức tính số lượng tế bào:
Số lượng tế bào = a * 1/K * 1/V
Trong đó: a: số khuẩn lạc trung bình mọc trên đĩa thạch. K: độ pha loãng.
V: thể tích dịch pha loãng được cấy gạt trên đĩa thạch.
* Làm tiêu bản vi sinh vật sống
Để xác định hình dáng, cấu trúc tế bào, sự chuyển động và đặc tính sinh sản của vi sinh vật ta làm tiêu bản sống. Tiêu bản sống có 2 dạng:
− Tiêu bản “giọt treo”: được chuẩn bị trên phiến kính có vết lõm tròn, được mài sẵn, rìa vết lõm được bôi bằng vazơlin, trên mặt dậy bằng lam kính ở giữa mang một giọt treo có vi sinh vật. Dùng tiêu bản này quan sát hình thái, sự chuyển động, sinh sản của tế bào vi sinh vật trong một thời gian tương đối dài dưới kính hiển vi.
− Tiêu bản “giọt giàn đều” trên phiến kính: lấy 1 giọt môi trường nuôi cấy vi sinh vật bằng vòng que cấy đưa lên phiến kính đã rửa sạch, rồi dàn đều, đậy bằng lam kính. Khi dậy tránh bột khí bên trong, lấy giấy lọc thấm khô dịch tràn ở bên ngoài lam kính.