Thuyết minh quy trình:
− Saccharomyces carlsbergensis đông khô được nhận từ Bộ sưu tập giống vi sinh vật của Viện Công Nghệ Sinh Học trường Đại học Bách Khoa – Hà Nội.
− Chuẩn bị môi trường Hansen dịch thể pha như phần môi trường nuôi cấy vi sinh cho vào bình tam giác 250ml khoảng 100ml dịch thể, rồi khử trùng ở 1210C trong 20 phút, để nguội.
− Cấy S.carlsbergensis đông khô: lấy 1 vòng que cấy S.carlsbergensis
đông khô cho vào môi trường dịch thể Hansen. Cấy S.carlsbergensis
Lên men trong MT Hansen (T0 phòng, t = 48h, tốc độ lắc: 220vòng/phút)
Pha loãng bằng nước muối sinh lý 0,85% vô trùng
S. carlsbergensis đông khô
Chuẩn bị môi trường Hansen dịch thể
Cấy lên môi trường thạch
Kiểm tra khuẩn lạc
Tách và tinh sạch khuẩn lạc
− Lên men: sau khi cấy S.carlsbergensisđông khô vào môi trường dịch thể xong ta để lên máy lắc, lắc tốc độ 220 vòng/phút, tại nhiệt độ phòng trong khoảng thời gian 2 ngày.
− Pha loãng mẫu: hút 1ml mẫu vào ống nghiệm chứa 9ml dd NaCl 0,85%. Đem lắc mẫu trên máy lắc. Pha loãng mẫu ttheo các nồng độ từ 10-1 đến 10-7. Lấy 0,1ml mẫu ở các nồng độ10-4, 10-6 rồi nhỏ vào các đĩa thạch riêng biệt đã ghi tên mẫu và nồng độ.
Sơđồ pha loãng mẫu như sau:
– Cấy lên môi trường thạch: dùng que cấy trang gạt đều mẫu trên bề mặt thạch. Sau đó để hộp Petri vào tủấm 250C, nuôi khoảng 2 ÷ 3 ngày.
− Tách và tinh sạch khuẩn lạc: sau khi nuôi cấy xong ta lấy ra chọn những khuẩn lạc mọc riêng rẽ và có kích thước lớn nhất, cấy ria theo các đường rích rắc vào hộp Peptri chứa môi trường Hansen thạch. Rồi để vào tủấm 250C, nuôi 2 ÷ 3 ngày.
Kiểm tra độ thuần khiết của giống bằng cách kiểm tra vết cấy, kiểm tra độ thuần chủng của các khuẩn lạc và kiểm tra tế bào nấm men dưới kính hiển vi.
− Giữ giống trong ống nghiệm: sau khi tinh sạch xong ta chọn khuẩn lạc mọc riêng rẽ cấy vào ống nghiệm thạch nghiêng.
Lưu ý: mọi thao tác trên phải được thực hiện trong điều kiện vô trùng: + Tay và bề mặt tiếp xúc trong tủ sấy được khử trùng bằng cồn. + Không khí trong tủđược khử trùng bằng tia UV.
+ Dụng cụ phải được khử trùng trên ngọn lửa đèn cồn. 1ml 1ml 1ml 1ml 10-1 10-2 10-3 10-4 10-5 1ml 9ml 9ml 9ml 9ml 1ml 10-7 10-1 10-2 10-3 10-4 10-5 9ml 1ml 1ml 9ml 10-6 0.1ml 0.1ml 0.1ml