Thử nghiệm Indole
Nguyên tắc: Phát hiện khả năng vi khuẩn có thể tạo indol trong mơi trường trypton
Cơ sở sinh hóa:
Tryptophan là một aminoacid có thể bi oxi hóa bởi một số vi sinh vật nhất định tạo nên các hợp chất indol hay các dẫn xuất của chúng như: indol, skatol (methyl indol) và indolacetic. Một số enzyme nội bào được gọi chung là tryptophanase tham gia trong quá trình tạo thành sản phẩm indol trong hoạt động giải phóng trytophane. Các hợp chất trung gian trong q trình thủy giải trytophan là acid indolepyruvic, từ đó indol được tạo thành trong quá trình khử amin, hình thành skatol là quá trình khử carboxyl acid indol acetic.
Sự tách amin từ tryptophane là một dạng phản ứng khử . Qua quá trình này nhóm amin được tách ra và chuyển thành NH3 , quá trình khử giải phóng một phần năng lượng được sử dụng cho hoạt động tăng trưởng của vi sinh vật . Đồng thời quá trình này cịn tạo thành acid pyruvic, cơ chất tham gia vào chu trình Krebs để tiếp tục thu năng lượng . Phát hiện indol và các dẫn xuất của chúng trong môi trường nuôi cấy bằng thuốc thử ovac's hay Ehrlich's.
48
cấy là p dimethylaminobenzaldehyde( DMAB ). Chất này phản ứng với indol tạo thành một phức hợp màu đỏ. Phản ứng này là do nhân pyrrol của indol phản ứng với nhóm aldehyde của DMAB qua hai giai đoạn để tạo thành nhân quinone có màu đỏ , phản ứng như sau.
Cách tiến hành và đọc kết quả:
Cấy vi sinh vật thử nghiệm được nuôi trong môi trường cạnh trypton khoản 24 - 48 giờ . Nhỏ vài giọt ether vào canh khuẩn nhằm kéo indol lên bề mặt một trường , thêm vài giọt thuốc thử ovac's hay Erhlich . Quan sát sau vài phút , phản ứng dương tính nếu trên bề mặt mơi trường có vịng màu đó xuất hiện . Ngược lại nếu khơng có sự xuất hiện của màu đỏ hồng được coi là phản ứng âm tính.