Thử nghiệm Voges- Proskauer
Nguyên tắc: Phát hiện khả năng vi sinh vật tạo thành một số sản phẩm trung tính acetylmethylcarbimol (acetoin) trong q trình lên men glucose.
Cơ sở sinh hóa
Thử nghiệm VP nhằm mục đích phát hiện acetoin, một sản phẩm trung tính trong quá trình trao đổi glucose trong tế bào vi sinh vật. Ở tế bào vi sinh vật, sự phân hủy glucose tạo ra sản phẩm trung gian là acid pyruvic, từ đó có thể
49
chia vi sinh vật thành 2 nhóm theo 2 con đường chuyển hóa pyruvic khác nhau nhu sau: nhóm trao đổi khơng tạo thành 2,3-butanediol như E.Coli là nhóm VP (-) và
nhóm trao đổi tạo thành 2,3-butanediol, như Klebsiella là nhóm VP (+). Tuy nhiên, phản ứng VP nhằm mục đích phát hiện acetoin là một tiền chất của 2,3-butanediol. Vì acetoin là tiền chất của 2,3-butanediol nên trong q trình ni cấy tích lũy rất ít. Để dễ dàng cho quá trình phát hiện, vi dinh vật phải được ni cấy trong điều kiện hiếu khí.
Để phát hiện acetoin trong môi trường nuôi cấy vi sinh vật, α- naphtol được sử dụng như một thuốc thử hát hiện môi trường kiềm mạnh được tạo ra OH 40% được cho vào môi trường thử nghiệm.
Cách tiến hành
Cấy vi sinh vật vào môi trường glucose phosphate (MR-VP broth), ủ ở nhiệt độ 300
C trong 2-5 ngày. Thêm vào canh khuẩn dịch thuốc thử α- naphtol 5% trong cồn và dung dịch OH 40% với tỷ lệ 3:1. Quan sát phản ứng xảy ra trong 5 phút.
Đọc kết quả
Thử nghiệm ( ): xuất hiện màu đỏ trên bề mặt môi trường Thử nghiệm (-): môi trường không đổi màu.
50