pháp phát hiện gene 16S RNA bằng kỹ thuật PCR
Bằng phương pháp test sinh hóa, chúng tôi đã phân lập được 22 chủng vi khuẩn C. perfringens. Tiến hành giám định lại loài vi khuẩn này theo phương pháp phát hiện gene 16S RNA bằng kỹ thuật PCR (Karl Mullis và cộng sự, 1985). Kết quả giám định loài vi khuẩn C. perfringens được thể hiện ở hình 3.9.
Hình 3.9. Kết quả giám định loài vi khuẩn C. perfringens bằng 16S RNA Chú thích:
M: Marker
(+): Đối chứng dương (-): Đối chứng âm
1, 2, 3, 6, 7, 12, 13, 14: các chủng vi khuẩn C. perfringens phân lập được.
Kết quả hình 3.9 cho thấy, các đoạn sản phẩm nằm ở vạch kích thước 658 bp tương ứng với kích thước sản phẩm cặp mồi của đoạn gene 16S RNA do Bộ môn Nghiên cứu Vi trùng - Phân viện Thú y miền Trung đưa ra. Kết quả giám định loài vi khuẩn C. perfringens bằng 16S RNA cũng được ghi lại ở bảng 3.3.
658 bp
100 bp 200 bp 400 bp 600 bp
Bảng 3.3. Kết quả giám định loài vi khuẩn C. perfringens bằng 16S RNA
Nguồn gốc chủng Số chủng kiểm tra Số chủng dương tính Tỷ lệ (%)
Mẫu phân gà khỏe mạnh 3 2 67
Mẫu phân gà nghi bệnh 11 11 100
Mẫu manh tràng 8 7 88
Tổng 22 20 91
Kết quả bảng 3.3 cho thấy, trong 22 chủng vi khuẩn C. perfringens đem giám định có 20 chủng dương tính với gene 16S RNA, 2 chủng âm tính. Từ kết quả này cho thấy độ chính xác trong phương pháp phân lập vi khuẩn bằng giám định các đặc tính sinh hóa đạt 91%. Có thể giải thích kết quả này như sau: Hiện nay, có một số loại vi khuẩn cũng có đặc tính sinh vật hóa học tương tự vi khuẩn C. perfringens, do vậy trong quá trình phân lập có thể dẫn đến nhầm lẫn. Tuy nhiên, cũng không thể phủ nhận những ưu thế của phương pháp truyền thống - Phân lập và giám định các đặc tính sinh hóa của vi khuẩn. Vì từ phương pháp này có thể tách được các chủng vi khuẩn thuần khiết với chi phí thấp. Và cũng từ kết quả nghiên cứu trên, chúng ta có thể sử dụng phương pháp PCR trong việc phát hiện nhanh loài vi khuẩn với độ chính xác khá cao.