Chúng tôi tiến hành thí nghiệm kiểm tra 22 chủng C. perfringens phân lập được trên các môi trường đặc hiệu, môi trường đường để kiểm tra các đặc tính sinh vật hóa học của vi khuẩn. Kết quả thu được như sau:
Trên môi trường Fluid Thioglycolate: cấy vi khuẩn C. perfringens vào môi trường Fluid Thioglycolate, sau 6 - 8 giờ nuôi cấy vi khuẩn trong tủ ấm ở 37oC, 10% CO2, vi khuẩn mọc rất tốt, làm đục đều môi trường.
Hình 3.3. Vi khuẩn trên môi trường Fluid Thioglycolate
Đối chứng Dương tính
Trên môi trường SPS agar: lấy dịch khuẩn nuôi cấy trên Fluid Thioglycolate cấy ria sang SPS agar, vi khuẩn phát triển tạo thành khuẩn lạc tròn, đen sau 24 giờ nuôi cấy trong túi yếm khí (tủ ấm 37oC, 10% CO2).
Hình 3.4. Khuẩn lạc trên môi trường SPS agar
Trên môi trường thạch máu: Khi ria vi khuẩn lên môi trường thạch máu, sau 24 giờ vi khuẩn phát triển cho khuẩn lạc tròn, nhẵn bóng, có hai vòng dung huyết xung quanh (hiện tượng dung huyết beta).
Trên môi trường Egg yolk, sau 24 giờ nuôi cấy trong điều kiện yếm khí ở tủ ấm 37oC, 10% CO2, 100% các chủng vi khuẩn kiểm tra phát triển sinh men lecithinase, thủy phân lecithine tạo thành vòng trắng sữa xung quanh khuẩn lạc.
Hình 3.6. Khuẩn lạc trên môi trường Egg yolk
Phản ứng CAMP test: Chúng tôi tiến hành đọc kết quả phản ứng CAMP test, sau 18 - 24 giờ nuôi cấy C. perfringens trong điều kiện yếm khí, thì nhận thấy 100% các chủng kiểm tra đều có phản ứng dương tính khi xuất hiện dung huyết hình mũi tên trên bề mặt thạch. Nhân tố protein được tiết ra bởi vi khuẩn S. agalactiae có vai trò tăng cường hoạt tính của alpha toxin và theta toxin. Đây là hai yếu tố đóng vai trò quan trọng gây ra hiện tượng dung huyết. Do đó, tăng cường điều kiện tiếp xúc và xúc tác thủy phân thành phần chủ yếu của màng hồng cầu là sphingomyelin làm hồng cầu trở nên dễ vỡ tạo nên hiện tượng dung huyết mạnh hơn ở vùng tiếp xúc giữa hai đường cấy của hai loài vi khuẩn.
Hình 3.7. Phản ứng CAMP test Streptococus agalactiae C . pe rf ri nge ns
Trên các môi trường đường (glucose, lactose, maltose, sucrose), sau 24 giờ nuôi cấy, 100% các chủng vi khuẩn kiểm tra đều lên men đường làm môi trường chuyển từ màu đỏ sang màu vàng. Vi khuẩn sử dụng đường tạo thành các sản phẩm trung gian có tính axit làm giảm pH của môi trường. Môi trường chuyển sang màu vàng với chỉ thị phenol red. Đồng thời, trên các môi trường đường xuất hiện các vết thạch bị nứt vỡ, chứng tỏ tất cả các chủng kiểm tra đều có khả năng sinh hơi.
Vi khuẩn không có khả năng lên men đường Mannitol - motility.
Trên môi trường Litmus milk, tất cả 22 chủng vi khuẩn C. perfringens kiểm tra đều lên men đường lactose, làm đông vón casein, môi trường chuyển từ màu tím sang nâu trắng với chỉ thị pH litmus sau 24 - 28 giờ trong tủ ấm 37oC, 10% CO2.
Đối chứng Glucose (+); Sucrose (+); Maltose (+); Lactose (+); Mannitol (-); Litmus milk (+).
Bảng 3.2. Kết quả kiểm tra đặc tính sinh vật hóa học của vi khuẩn C.perfringens STT Tính chất Số chủng kiểm tra Số chủng dương tính Tỷ lệ (%) 1 Gram dương 22 22 100 2 Di động 22 22 0 3 Fluid Thioglycolate 22 22 100 4 SPS agar 22 22 100 5 Thạch máu 22 22 100
6 Lên men Glucose 22 22 100
7 Lên men Sucrose 22 22 100
8 Lên men Maltose 22 22 100
9 Lên men Lactose 22 22 100
10 Lên men Mannitol - motility 22 0 0
11 Sinh hơi 22 22 100
12 Litmus milk 22 22 100
13 Egg yolk 22 22 100
14 CAMP test 22 22 100
Qua bảng 3.2 cho thấy, 100% các chủng kiểm tra đều không có khả năng di động và không lên men đường mannitol. Trên các môi trường đường: glucose, lactose, maltose, sucrose: sau 24 giờ nuôi cấy, tất cả các chủng vi khuẩn đều phát triển, lên men đường làm môi trường chuyển từ màu đỏ sang màu vàng trong điều kiện yếm khí với chỉ thị phenol red. Tất cả môi trường đều xuất hiện các vết thạch bị nứt, vỡ chứng tỏ tất cả các chủng đều có khả năng sinh hơi. Mặt khác, trên các môi trường đặc trưng thì tất cả các chủng được kiểm tra đều cho kết quả dương tính.