Để kiểm tra một số đặc tính sinh vật hóa học của C. perfringens, chúng tôi tiến hành chọn khuẩn lạc đặc trưng trên môi trường thạch máu (xung quanh khuẩn lạc có vòng dung huyết) cấy lên các môi trường sinh hóa:
Xác định khả năng lên men đường glucose, lactose, maltose, sucrose.
Dùng que cấy vô trùng chọn lấy khuẩn lạc cần kiểm tra, chích sâu xuống đáy mỗi ống nghiệm có chứa từng loại đường riêng biệt, sau đó nuôi trong điều kiện yếm khí (để tủ ấm 37oC, 10% CO2). Sau 24 - 28 giờ lấy ra đọc kết quả, phản ứng dương tính khi môi trường chuyển từ màu đỏ sang vàng và ngược lại.
Kiểm tra khả năng sinh hơi: Vi khuẩn có khả năng sinh hơi trên các môi trường đường, nếu thạch bị nứt hoặc bị đẩy lên trên và ngược lại.
Dùng que cấy vô trùng lấy khuẩn lạc cần kiểm tra cấy một đường chích sâu xuống đáy ống nghiệm, nuôi trong điều kiện yếm khí. Sau 24 - 28 giờ lấy ra đọc kết quả.
+ Vi khuẩn có khả năng di động sẽ làm môi trường đục đều.
+ Vi khuẩn di động yếu chỉ làm đục môi trường xung quanh đường cấy. + Vi khuẩn không di động chỉ mọc trên đường cấy.
Kiểm tra khả năng phát triển trên môi trường Litmus milk
Dùng que cấy vô trùng lấy khuẩn lạc cấy vào môi trường Litmus milk, nuôi cấy trong điều kiện yếm khí, sau 24 - 28 giờ kiểm tra. Phản ứng dương tính khi vi khuẩn lên men lactose, làm đông vón casein, môi trường chuyển từ màu tím sang nâu trắng với chỉ thị pH litmus.
Kiểm tra khả năng lên men lecithinase trên môi trường Egg yolk
Dùng que cấy vô trùng chọn lấy khuẩn lạc cấy ria đều trên môi trường Egg yolk. Nuôi cấy trong điều kiện yếm khí, đặt trong tủ ấm CO2 ở 37oC, sau 24 - 28 giờ lấy ra đọc kết quả. Phản ứng dương tính khi vi khuẩn phát triển sinh men lecithinase phân giải lecithin tạo thành vòng trắng sữa xung quanh khuẩn lạc và ngược lại.
Phản ứng CAMP test
Dùng que cấy vô trùng lấy khuẩn lạc S. agalactiae cấy một đường vào môi trường thạch máu. Sau đó, lấy khuẩn lạc C. perfringens cấy một đường vuông góc với đường đã cấy. Tiến hành nuôi cấy trong điều kiện yếm khí (tủ ấm 37oC, 10% CO2). Sau 18 - 24 giờ tiến hành đọc kết quả, phản ứng dương tính khi xuất hiện dung huyết hình mũi tên trên bề mặt thạch ở chổ tiếp xúc giữa vi khuẩn C. perfringens và S. agalactiae.