Chương 2 ĐỐI TƯỢNG VÀ PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU
2.2. PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU
2.2.3. Phương tiện nghiên cứu
2.2.3.1. Vật liệu nghiên cứu
Mẫu nước tiểu 24h: 5ml nước tiểu 24h được bảo quản bằng dung dịch thymol 10%.
Mẫu máu cho phân tích sinh hóa: 2 ml máu tĩnh mạch đựng trong ống nghiệm chống đông bằng Heparin.
Mẫu cho phân tích gen: 2 ml máu tĩnh mạch được đựng vào ống nghiệm chống đông EDTA.
2.2.3.2. Hóa chất
- Cặp mồi được đặt tổng hợp từ hãng IDT-Mỹ với trình tự đã được sử dụng trong các nghiên cứu trước đây [11]
- Lambda DNA/HindIII Marker, code: SM0103, hãng: Thermo Scientific - 6X DNA loading dye, code: R0611, hãng: Thermo Scientific
- GeneRuler 100 bp Plus DNA Ladder, code: SM0321, hãng: Thermo Scientific - Pfu hãng Thermo Scientific
- dNTP Mix, 2 mM each, code: R2041, hãng: Thermo Scientific - Nước khử ion, code: PD092, hãng: Omega Biotek
- Ultra Pure Agarose, code: 16500100, hãng: Invitrogen - Tris base, code: TB0196, hãng: Bia basic
- Ethidium bromide 10mg/ml, hãng: Beckman
- E.Z.N.A blood DNA Mini kit, code: D3392, hãng: Omega Biotek
- Big Dye Terminator v3.1 cycle sequencing kit, hãng: Thermo Fisher Scientific
- GeneJET PCR Kit, hãng: Thermo Fisher Scientific
- Big Dye Terminator Purification kit, hãng: Thermo Fisher Scientific
2.2.3.3. Thiết bị
- Máy xét nghiệm sinh hóa tự động AU2700 và hóa chất của hãng Beckman Coulter - Máy PCR Prime Thermal Cycler (code: 5PRIME/02, Anh)
- Máy đo nồng độ DNA Eppendorf Bio Photometer Plus (Eppendorf, Đức) - Máy giải trình tự 3500 Genetic Analyzer applied Biosystems, Mỹ
- Hệ thống điện di Cole-Parmer (code 97623-06, Mỹ)
- Máy soi và chụp ảnh Gell (code UVCI01 Compact Digimage System, Mỹ) - Máy lắc VELP Scientifica (code D20220176, Châu Âu)
- Máy ly tâm EBA21 Hettich Zentrifugen, code D78532, Đức - Máy Vortex VELP Scientifica, code F2020176, Châu Âu - Cân điện tử Model: AWS, Mỹ
- Tủ lạnh âm sâu Panasonic, model MDF - U334 - PE, Nhật Bản
2.2.3.4. Dụng cụ
- Các pipet Eppendorf dải: 0,5 - 10 µl, 10 - 100 µl, 100 - 1000 µl, hãng Thermo - Đầu cơn: 10 µl, 200 µl, 1000 µl, hãng Thermo
- Ống Eppendorf 1,7 µl, hãng Thermo - Ống PCR 0,2 ml, hãng Thermo
- Ống máu EDTA 5 ml, hãng HTM - Việt Nam - Khay đổ gel, lược tạo giếng
- Bình thủy tinh, cốc đong
- Găng tay, khẩu trang Việt Nam - Giấy không bụi M3, Nhật Bản