1.1.6 .Độc tính của các hợp chất PCBs
1.3. Các phương pháp phântích PCBs
1.3.4. Các phương pháp khác
Phương pháp xét nghiệm hấp thụ miễn dịch liên kết với Enzym.
Nguyên tắc: Phương pháp ELISA (Enzyme Linked Immunosorbent Assay- xét nghiệm hấp thụ miễn dịch liên kết với enzyme) có rất nhiều dạng mà đặc điểm chung là đều dựa trên sự kết hợp đặc hiệu giữa kháng nguyên và kháng thể, trong đó kháng thể được gắn với một enzyme. Khi cho thêm cơ chất thích hợp (thường là nitrophenol phosphate) vào phản ứng, enzyme sẽ thủy phân cơ chất thành một chất có màu. Sự xuất hiện màu chứng tỏ đã xảy ra phản ứng đặc hiệu giữa kháng thể với kháng nguyên và thông qua cường độ màu mà biết được nồng độ kháng nguyên hay kháng thể cần phát hiện.
Phương pháp này được thiết kế cho việc phát hiện và định lượng các chất như peptides, protein, antibodies, hormone,… Đơi khi nó cịn được gọi bởi một tên gọi khác là EIA (Enzyme ImmunoAssay)
Kĩ thuật này khá nhạy và đơn giản, cho phép ta xác định kháng nguyên hoặc kháng thể ở một nồng độ rất thấp (khoảng 0,1 ng/ml). So với kĩ thuật miễn dịch phóng xạ (RIA- Radio Immuno Assay) thì kĩ thuật này rẻ tiền và an toàn hơn mà vẫn đảm bảo độ chính xác như nhau. ELISA được dùng để xác định nhiều tác nhân gây bệnh như virus, vi khuẩn, nấm, kí sinh.
Kĩ thuật ELISA gồm ba thành phần tham gia phản ứng là: kháng nguyên, kháng thể và chất tạo màu; thực hiện qua hai bước:
- Phản ứng miễn dịch học: Là sự kết hợp giữa kháng nguyên và kháng thể - Phản ứng hóa học: Thơng qua hoạt tính xúc tác của enzyme làm giải phóng oxy nguyên tử [O] từ HO để oxy hóa cơ chất chỉ thị màu, do đó làm thay đổi màu của hỗn hợp trong dung dịch thí nghiệm.[16]
Tomoaki Tsutsumia, Yoshiaki Amakuraa,..[38] đã sử dụng kit thử xét nghiệm hấp thụ liên kết với enzym (ELISA)để xác định độ độc tương đương (TEQs) của polyclo biphenyl giống dioxin (PCBs) trong cá bán tại các chợ. Phương pháp ELISAnày xác định chọn lọc cụ thể cho 2,3, 4,4, 5 pentachlorobiphenyl (PCB 118), PCB giống như dioxin thường thấy trong cá. Giới hạn định lượng của phương pháp ELISA (sử dụng 3,3', 4'-trichloro-4-methoxybiphenyl là chuẩn đồng hành để xác định PCB 118) là 10 ng/ ml (125 pg / thử nghiệm) trong đường chuẩn, tương ứng với 50 pg PCB 118/ g trong mẫu xét nghiệm. Độ thu hồi của cách chiết PCB 118 theo ELISA (78/,7-112,3%) làm thử nghiệm trên mẫu cá khơng chứa PCBs. Khoảng tuyến tính rộng, khơng tín hiệu ảnh hưởng từ nền bằng phương pháp chiết này.Độ thu hồi của PCB 118 được thêm vào mẫu cá từ (60,2-82,3%). Kết quả thu được từ ELISA cho mẫu cá tương quan với nồng độ TEQ giống như dioxin-PCBs thu được bằng phương pháp sắc ký khí độ phân giải cao ghép nối khối phổ độ phân giải cao (r = 0,92, n = 26). Những dữ liệu này chỉ ra rằng các bộ kit ELISA là thích hợp cho sàng lọc cá bán ở các chợ.