2.1 .Khảo sát quy trình chuẩn bị mẫu
2.4.1. Khảosát ảnh hưởng của đệm pHtrên khả năng giữ lại Sal, Clen, Rac
Để chọn mơi trƣờng thích hợp cho qui trình chiết mẫu, tiến hành các bƣớc sau:
- Bước 1: chuẩn bị 6 ống ly tâm nhựa 50ml, cho vào mỗi ống 20ml dung dịch
dịch K2HPO4 0,1M trong từng ống ly tâm lần lƣợt về các môi trƣờng pH = 5,0; 5,5; 6,0; 6,5; 7,0; 7,5 bằng máy đo pH.
- Bước 2: chuẩn bị 6 ống ly tâm nhựa 50ml, cho vào mỗi ống ly tâm 0,1ml hỗn
hợp nội chuẩn (sal-d3: 4μg/L; clen-d9: 2μg/L; rac-d6: 2μg/L) và 0,1ml hỗn hợp chuẩn (sal: 7,763 4μg/L; clen: 1,9814μg/L; rac:). Sau đó, cho lần lƣợt vào mỗi ống ly tâm 10ml dịch chiết đệm K2HPO4 0,1M có giá trị pH tƣơng ứng lần lƣợt là 5,0; 5,5; 6,0; 6,5; 7,0; 7,5 vừa chuẩn bị ở bƣớc 1 dùng để chiết mẫu,lắc vortex các ống ly tâm.
- Bước 3: Chuẩn bị cột SPE (Strata-SCX), hoạt hóa mỗi cột SPE bằng 6ml
MeOH, 6ml H2O khử ion, 6ml đệm K2HPO4 0,1M có pH ứng với pH dùng chiết mẫu.
- Bước 4: Cho tất cả dịch chiết (sal, clen, sal-d3, clen-d9) đã chuẩn bị ở bƣớc 2
lên cột SPE, cho dung dịch chảy chậm qua cột với tốc độ 1ml/1 phút.
- Bước 5: Rửa cột SPE lần lƣợt bằng 3ml nƣớc, 3ml hỗn hợp MeOH:H2O (10
: 90) rút chân không đến khô cột.
- Bước 6: Rửa giải chất cần xác định trên cột SPE vào ống nghiệm bằng 5ml
hỗn hợp MeOH : NH4OH đđ (95 : 5).
- Bước 7: Thổikhơ dịch rửa giải dƣới dịng khí nitơ.
- Bước8: Hútchínhxác 1mlpha độnglà: MeOH:H2O(15:85),cho vào ống
nghiệm chứa dịch rửa giải đã thổi khô và lắc thật kĩ.
- Bước 9: Lọc dung dịch qua màng lọc 0,45µm và tiêm mẫu vào thiết bị LC-
MS/MS với các thơng số đã đƣợc tối ƣu hóa.