Salbutamol 0,05 8450 14600 18 0,5 77900 16800 15 1 144000 15700 15 10 1240000 14700 7 50 5280000 13900 -3,5
100 9120000 11500 1 Phƣơng trình hồi quy: y = 0,787x + 0,0116 (R2 = 0,9997)
Clenbuterol 0,05 10700 14000 3 0,1 20900 15100 -5 0,5 112000 14500 -7 5 1080000 14400 -5 10 2010000 14500 -3 50 8390000 11700 0
Phƣơng trình hồi quy: y = 1,43x + 0,00244 (R2 = 1,00)
Ractopamine 0,05 4600 140000 17 0,1 7970 151000 5 0,5 37000 145000 14 50 2630000 122000 -0,3 100 4840000 111000 0 Phƣơng trình hồi quy: y = 0,434x + 0,00741 (R2 = 1,00)
Nhận xét: tỉ lệ diện tích peak β2-agonist/diện tích peak IS tuyến tính với nồng
độ β2-agonist trong khoảng 0,05 – 50 ng/ml với hệ số tƣơng quan R2> 0,999.
Hình 3.15: Đƣờng chuẩn Clen(R2 = 1,0000)
Hình 3.16: Đƣờng chuẩn Rac (R2 = 1,0000)
3.3.2. Giới hạn phát hiện (LOD), giới hạn định lượng (LOQ) của phương pháp.
Giới hạn phát hiện đƣợc định nghĩa là nồng độ nhỏ nhất của chất phân tích mà phƣơng pháp phân tích có thể phát hiện đƣợc, có tín hiệu sắc ký lớn gấp 3 lần tín hiệu đƣờng nền. Đây là một thơng số đặc trƣng cho độ nhạy của phƣơng pháp. Chất nào nhạy hơn sẽ có giới hạn phát hiện nhỏ.
Cũng theo phƣơng pháp này giới hạn định lƣợng là nồng độ nhỏ nhất chất phân tích mà có tín hiệu lớn gấp 10 lần tín hiệu nhiễu đƣờng nền hay mẫu trắng S/N ≥ 10.
Thêm các nồng độ nhỏ dần của hỗn hợp 3 β2-agonist vào dịch chiết mẫu trắng (mẫu thực không phát hiện chất phân tích cho đến khi thu đƣợc tỷ số tín hiệu/nhiễu (S/N) ≥ 3, thu đƣợc kết quả LOD, LOQ của các β2-agonist nhƣ sau:
Bảng 3.8: Giới hạn phát hiện và giới hạn định lƣợng của các β2-agonist trong nền mẫu thịt Chất PT LOD (ppb) LOQ (ppb) S/N Salbutamol 0,015 0,05 4,1 Clenbuterol 0,015 0,05 4,7 Ractopamine 0,015 0,05 3,8
Nhận xét: Từ kết quả trên cho thấy LOD của Salbutamol, Clenbuterol và
Ractopamine là 0,015ppb. LOQ của Salbutamol, Clenbuterol và Ractopamine là 0,05ppb.
Hình 3.17: Sắc đồ LOD của Sal, Clen, Rac trong nền mẫu thịt
Bảng 3.9: Giới hạn phát hiện và giới hạn định lƣợng của các β2-agonist trong nền mẫu TACN
Chất PT LOD (ppb) LOQ (ppb) S/N
Salbutamol 0,015 0,05 3,6
Clenbuterol 0,015 0,05 3,7 Ractopamine 0,015 0,05 3,2
Hình 3.18: Sắc đồ LOD của Sal, Clen, Rac trong nền mẫu TACN
Bảng 3.10: Giới hạn phát hiện và giới hạn định lƣợng của các β2-agonist trong nền mẫu nƣớc tiểu lợn
Chất PT LOD (ppb) LOQ (ppb) S/N
Salbutamol 0,015 0,05 4,0
Clenbuterol 0,015 0,05 4,5 Ractopamine 0,015 0,05 3,6
3.3.3. Đánh giá độ chụm (độ lặp lại) và độ đúng (độ thu hồi)
Đây là hai yếu tố quan trọng đánh giá hiệu quả của phƣơng pháp phân tích. Để tiến hành xác định hai yếu tố này, chúng tôi tiến hành thêm chuẩn trên nền mẫu thức ăn chăn nuôi,mẫu nƣớc tiểu lợn và mẫu sản phẩm thịt không phát hiện β2- agonist, thêm chuẩn tại 3 mức nồng độ MRL/2; MRL; 2MRL. Mỗi mức chúng tôi tiến hành làm lặp lại 6 lần. Độ thu hồi theo công thức (1) và độ lặp lại đƣợc xác định theo các đại lƣợng SD và RSD nhƣ công thức dƣới đây:
Trong đó:
Htb : Hiệu suất thu hồi trung bình của 6 lần làm lặp Hi : Hiệu suất thu hồi của lần phân tích thứ i n: Số lần phân tích lặp (6 lần)
SD: Độ lệch chuẩn.
RSD: Độ lệch chuẩn tƣơng đối (%).
3.3.3.1. Tiến hành thực nghiệm trên mẫu thịt
Phân tích mẫu thịt trắng thêm chuẩn tại 3 mức nồng độ: Salbutamol 2,5; 5; 10ppb; Clenbuterol 0,1; 0,2; 0,4ppb; Ractopamine 0,5; 1,0; 2,0ppb. Mỗi mức làm lặp lại 6 lần. Tiến hành phân tích trong cùng một thời điểm. Kết quả nhƣ sau: