Nồng độ acid formic (%)
Diện tích peak (× 105)
Sal Clen Rac
0 4,36 2,94 4,08
0,05 10,4 5,70 5,05
0,1 9,48 8,78 8,83
0,15 9,80 6,47 5,70
0,2 8,99 5,71 4,59
Nhận xét: Nếu pha động khơng chứa acid formic, cƣờng độ tín hiệu của tất
cả các β2-agonist đều thấp. Khi tăng nồng độ acid formic tƣ̀ 0,05 – 0,2%, diện tích peak đều tăng. Khi nồng độ acid formic cao, số lƣợng ion đi vào buồng ion của detector MS tăng, gây cạnh tranh với các ion của chất phân tích, làm giảm tín hiệu. Tất cả cácβ2-agonistđều cho tín hiệu cao nhất tại nồng độ acid formic 0,1%. Chúng
tôi quyết định chọn nồng độ acid formic 0,1%. Nồng độ này cũng phù hợp với các hệ LC-MS/MS.
Hình 3.10: Sắc đồ các β2-agonist tại nồng độ acid formic 0,1%
Tóm lại: Các thơng số tối ƣu cho q trình tách sắc ký là:
- Cột Agilent C18 (150mm x 2,1mm x 3,5µm)
- Pha động kênh A (nƣớc chứa 0,1% acid formic); kênh B(acetonitril) theo chƣơng trình gradient:
t(phút) 0,01 1,00 3,00 4,50 6 7 10 % ACN 0 0 30 100 100 0 0 - Tốc độ dòng: 0,5 ml/phút.
- Thể tích bơm mẫu: 10 µl.
3.2. Tối ƣu q trình xử lý mẫu phân tích các β2-agonist
3.2.1. Quy trình xử lý nên mẫu thịt và thức ăn chăn nuôi 3.2.1.1 . Chọn cột chiết SPE 3.2.1.1 . Chọn cột chiết SPE
Chúng tôi chọn cột trao đổi chiết pha rắn trao đổi ion axit mạnh Strata SCX (Phenomenex).
Cơ chế chiết là cơ chế trao đổi ion:
R-SO3H +–N+– - [R-SO3]-[-N+-] + H+
Với cột chiết loại trao đổi ion, nền mẫu ở dạng dung dịch phải đƣợc chỉnh pH thích hợp bằng dung dịch đệm có lực ion thấp. ở đây chúng tôi sử dụng đệm
K2HPO4 vừa để phá nền mẫu đồng thời để chỉnh pH. Q trình hoạt hố, trƣớc tiên phải hoạt hoá bằng dung dịch chất hữu cơ phân cực nhƣ MeOH, ACN, Axeton... sau đó, cân bằng cột bằng đệm đã chọn.
Cấu tạo của hạt nhồi SCX:
3.2.1.2 . Khảo sát pH chiết
Pha các dung dịch đệm K2HPO4 0,1M tại các pH khác nhau:5; 5,5; 6; 6,5; 7. Xử lý mẫu với quy trình chiết ở trên rồi bơm vào hệ thống LC/MS/MS chạy các điều kiện tối ƣu đã khảo sát ở trên.