Các môi trường và dung dịch

2.1. Chủng giống và vật liệu nghiên cứu

2.1.5. Các môi trường và dung dịch

2.1.5.1. Môi trường sử dụng trong biểu hiện protein

- Môi trường LB: Cao nấm men (0,5%), Bacto trypton (1%), NaCl (1%). - Môi trường LB lỏng chọn lọc (có bổ sung Ampicillin) : thành phần như mơi trường LB, sau đó bổ sung Ampicillin đến nồng độ cuối cùng là 100 μg/ml.

2.1.5.2. Dung dịch sử dụng trong tiền tinh chế protein Interleukin-2 sau khi biểu hiện

- Đệm I (Buffer I): Tris 20 mM, EDTA 10 mM, PMSF 0,05 mM.

- Đệm II (Buffer II): Tris 20 mM, EDTA 10 mM, PMSF 0,05 mM, Triton- X100 0,1-0,2%.

- Đệm III (Buffer III): Sucrose 60%.

- Đệm IV (Buffer IV): Tris 50 mM, EDTA 10 mM, Guanidine HCl 7 M.

2.1.5.3. Dung dịch sử dụng trong chạy hệ thống sắc ký HPLC

- Đệm A (Buffer A): 0,5% acid citric.

- Đệm B (Buffer B): 0,5% acid citric, 60% Iso-propanol.

2.1.5.4. Dung dịch sử dụng trong điện di protein trên gel polyarylamid-SDS

- Các loại hóa chất cần thiết cho đổ gel: Bis-acrylamide 30%, Glycerol 50%, Tris HCl 1,5 M (pH = 8,8), Tris HCl 0,5 M (pH = 6,8), APS 10%, TEMED.

- Đệm xử lý mẫu trước khi điện di (Treatment buffer 6X): Tris HCl 0,36 M (pH=8), Glycerol 60%, SDS 12%, Bromophenol blue (0,06%), 2-mecaptoethanol 3/10 (v/v).

Bảng 3. Công thức cho 2 bản gel SDS-PAGE (gồm 2 lớp gel tách và gel cơ)

Hóa chất: Gel tách (12,6%) Gel cô (5%)

H2O 1 ml 1,3 ml Tris-HCl 1,5 M (pH 8,8) 2,25 ml 0 ml Tris-HCl 0,5 M (pH 6,8) 0 ml 0,5 ml Glycerol 50% 1,8 ml 0 ml Acrylamide 30% 3,8 ml 0,35 ml SDS 10% 90 μl 10 μl APS 10% 60 μl 20 μl TEMED 6 μl 2 μl

2.1.5.5. Dung dịch sử dụng để hiện kết quả điện di protein trên gel polyacrylamide-SDS

* Đệm xử lý mẫu trước khi điện di (Sample buffer 6X): Tris 0,375M (pH=8), Glycerol 60%, SDS 12%, Bromophenol blue (0,06%), 2-mecaptoethanol 3/10 (v/v).

* Đệm chạy điện di (Running buffer): Glycine 192 mM, Tris base 25 mM, SDS 0,1%.

* Dung dịch sử dụng cho phương pháp nhuộm Coomassie:

Dung dịch nhuộm gel (Coomassie blue staining): Coomassie Brilliantblue: 0,025%; Methanol 40%; Acid acetic: 10%.

Dung dịch tẩy rửa (Destaining): Methanol: 5%, Acid acetic: 7,5%; * Dung dịch sử dụng cho phương pháp nhuộm bạc (silver stainning):

Dung dịch cố định (Fixing solution): Ethanol 50%, Acetic acid 12%, Formaldehyde 0,05%.

Dung dịch nhạy hóa (Sensitising solution): Na2S2O3. 5H2O 0,02%.

Dung dịch nhuộm bạc (Silver staining solution): AgNO3 0,2%, Formaldehyde 0,075%.

Dung dịch hiện màu (Developing solution): Na2CO3 6%, Na2S2O3. 5H2O 0,0004%, Formaldehyde 0,05%.

Dung dịch dừng phản ứng (Stopping solution): Glycine 1%.

2.1.5.6. Dung dịch sử dụng trong phản ứng Western blot

Dung dịch blotting buffer: Tris-HCl 25mM pH=8, Glycine 190 mM, Methanol 20%.

Dung dịch TBS: Tris-HCl 25 mM pH=8, NaCl 50 mM.

Dung dịch TTBS: Tris-HCl 25 mM pH=8, NaCl 50 mM, Tween20 0,1%.