2.2. Phương pháp nghiên cứu
2.2.7. Phương pháp xử lý kết quả điện di SDS-PAGE bằng phần mềm Quantity
One.
- Rửa sạch bản gel polyacrylamide kết quả để tránh sai số. Chụp ảnh bằng máy kỹ thuật số Canon hoặc quét ảnh bằng hệ thống soi ảnh của Bio-rad.
- Nhập ảnh vào máy tính, chuyển ảnh từ định dạng .jpg sang .tif. - Mở kết quả ảnh bằng phầm mềm Quanlity One.
- Xác định các đường chạy trên ảnh kết quả bằng công cụ Lane frames. Các đường chạy nên chọn vị trí chính giữa của băng protein.
- Trên đường chạy đã xác định, thêm các thang protein mong muốn bằng công cụ Add bands. Mỗi băng protein chọn trên hình nên xác định bao trọn băng protein để tránh sai số.
- Xác định đường nền cho phổ hấp thụ qua hai chức năng Sub-background và Lane background.
- Nháy chuột vào nút công cụ Band in lane để truy xuất kết quả dạng phổ hấp thụ của protein (chế độ Relative Qty dùng để xác định % độ sạch của băng trên tổng số các băng trong 1 lane).
- Sử dụng chức năng Band attributes để tính tốn mức hấp phụ trên mỗi thang protein.
- Kết quả dạng ảnh có thể truy xuất bằng chức năng Export của phần mềm Quantity One. Kết quả số liệu dạng bảng được truy xuất bởi công cụ Report.
CHƯƠNG III - KẾT QUẢ VÀ THẢO LUẬN
Nhằm làm tăng hoạt tính và giảm tính độc cho sản phẩm IL-2, chúng tơi đã sử dụng các kỹ thuật sinh học phân tử nhằm tạo đột biến mất amino acid Alanine ở đầu N, thay thế Cysteine ở vị trí 125 bằng Serine. Trình tự amino acid suy diễn từ trình tự DNA mã hóa cho IL-2 giống hồn tồn so với trình tự amino acid của một sản phẩm IL-2 tái tổ hợp đã được FDA công nhận cấp phép và sử dụng trong hỗ trợ điều trị các bênh nhân ung thư thận và ung thư hắc tố. Chủng E. coli BL21 đã được biểu hiện thành cơng ở trong bình tam giác quy mơ phịng thí nghiệm, tuy nhiên IL- 2 là một sản phẩm có thể sản xuất và tiêu thụ ra thị trường, vì vậy làm sao để thu được lượng IL-2 lớn nhất, độ tinh sạch cao với chi phí thấp là mục tiêu của để tài. Từ cơ sở biểu hiện thành công chủng E. coli mang gene mã hóa IL-2 trong phịng
thí nghiệm, chúng tơi chuyển sang nghiên cứu biểu hiện ở quy mô lớn hơn là nồi lên men 5 lít.
Nội dung nghiên cứu của đề tài bao gồm:
- Tối ưu điều kiện lên men biểu hiện gene il-2 ở quy mơ nồi lên men 5 lít nhằm thu được lượng IL-2 cao nhất.
- Tiền xử lý và tinh chế IL-2 bằng hệ thống sắc ký HPLC.
- Xây dựng công thức bán thành phẩm pha chế IL-2 trong đông khô.