3.1. Nuôi cấy chủng E coli BL21 IL-2 trong hệ thống lên men lớn
3.1.4. Lên men chủng E coli BL21 IL-2 đợt 2
Q trình lên men đợt 2 có bổ sung dinh dưỡng 2 lần vào các thời điểm lên men 3 giờ và 5,5 giờ, cảm ứng IPTG nồng độ cuối cùng 0,1 mM khi OD600 đạt 16,3 vào thời điểm lên men 5,5 giờ, dừng lên men sau 6 giờ cảm ứng OD600 đạt 17,4 (Hình 11).
A B
Hình 11. Lên men chủng tái tổ hợp E. coli BL21 IL-2 đợt 2
A: Đường cong sinh trưởng. B: Điện di kiểm tra trên gel polyacrylamide 12,6%.
Đường chạy M: Thang protein chuẩn (Fermentas #SM0431);
Đường chạy 1-6: Dịch protein tổng số ở các thời điểm 1-6 giờ sau khi cảm ứng;
Kết quả trên Hình 11 cho thấy sự thay đổi quy trình biểu hiện IL-2 so với đợt 1 với việc chỉ bổ sung 2 lần glucose 1% và cao nấm men 0,5% và giảm nồng độ cảm ứng IPTG xuống 0,1 mM thì chủng E. coli BL21-IL2 vẫn phát triển tốt và đạt OD600 là 20 sau 10 giờ lên men. Theo quy trình này thời gian thu mẫu tăng lên từ 3 giờ lên 6 giờ và giá trị OD600 thu mẫu đạt khoảng OD600 là 18. Như vậy quy trình này sẽ tiết kiệm được chi phí lên men do giảm thành phần bổ sung dinh dưỡng; giảm nồng độ IPTG mà kết quả thu được là sự sinh trưởng của chủng E. coli BL21- IL2 tốt hơn so với đợt lên men ban đầu. Để kiểm tra khả năng biểu hiện của chủng này chúng tôi đã điện di kiểm tra sản phẩm lên men trên SDS-PAGE với các mẫu lên men thu được ở các giờ khác nhau. Kết quả trên Hình 11B cho thấy lượng