CHƯƠNG 2 VẬT LIỆU VÀ PHƯƠNG PHÁP
2.2.6 Phương pháp xác định hoạt tính chống oxi hóa
Hoạt tính chống oxi hóa được xác định theo phương pháp của Patel và cộng sự (2011). Phương pháp được thực hiện dựa trên nguyên lý DPPH (1,1-Diphenyl-2- picrylhydrazyl) có khả năng tạo ra các gốc tự do bền trong dung dịch methanol 99%. Khi cho chất thử nghiệm vào dung dịch DPPH, nếu chất có khả năng quét các
của các gốc tự do DPPH. Ho thụ ánh sáng của dung d kết quả được đọc trên máy
Hình 2.5. Sơ đồ phả
- Vật liệu và hóa ch
và dung dịch axit ascorbic (10 mg/ml) đư trước khi sử dụng và b - Quy trình thực hi + Xây dựng đườ Chuẩn bị dung d 300, 400, 500, 600, 700 µg/ml trong methanol 99% Hút 50 µl dung d nghiệm đã đư Lần lượt bổ Tiếp tục bổ Vortex các m hấp thụ quang ph + Đối với mẫu th
nghiệm như trên.
+ Đo mẫu chuẩn (control) một ống nghiệ
do DPPH. Hoạt tính chống oxi hóa được đánh giá thơng qua đ a dung dịch thử nghiệm so với dung dịch đối ch
ên máy đo độ hấp thụ quang phổ ở bước sóng 517 nm
ản ứng trung hịa gốc DPPH của các chất ch
u và hóa chất: Dung dịch DPPH (1,1-Diphenyl-2-picrylhydrazyl)
ch axit ascorbic (10 mg/ml) được chuẩn bị trong methanol 99% ng và bảo quản tránh ánh sáng.
c hiện:
ờng chuẩn axit ascorbic
dung dịch axit ascorbic ở các nồng độ khác nhau: 100, 200, 300, 400, 500, 600, 700 µg/ml trong methanol 99% từ
Hút 50 µl dung dịch axit ascorbic các nồng độ tương được bọc kín bằng giấy bạc để tránh ánh sáng. ổ sung thêm 2950 µl methanol vào các ống nghi
sung vào mỗi ống 1500 µl dung dịch DPPH 1 mM Vortex các mẫu và giữ trong tối ở nhiệt độ phòng, sau 15 phút
quang phổ ở bước sóng 517 nm.
u thử nghiệm, pha loãng tới nồng độ thích h m như trên.
n (control): Dùng pipet hút 3 ml dung dịch methano
ệm sạch được bọc giấy bạc. Bổ sung thêm 150 µl dung d c đánh giá thông qua độ hấp
i chứng là axit ascorbic, c sóng 517 nm [47]. t chống oxi hóa [40] picrylhydrazyl) 1 mM trong methanol 99% khác nhau: 100, 200, ừ dung dịch gốc. tương ứng vào các ống tránh ánh sáng. ng nghiệm trên. ch DPPH 1 mM
phòng, sau 15 phút đem đo độ
thích hợp rồi làm thí
ch methanol 99% vào sung thêm 150 µl dung dịch
DPPH 1 mM và lắc đều, ngay sau đó mang hỗn hợp đi đo độ hấp thụ quang phổ ở bước sóng 517 nm. Ghi lại kết quả vừa đo được.
- Xử lý kết quả
+ Hoạt tính chống oxi hóa, đo bằng khả năng quét gốc tự do DPPH được tính theo cơng thức sau:
% Hoạt động = [(Acontrol - Amẫu thử nghiệm)/ Acontrol] × 100 Trong đó:
Acontrol: Độ hấp phụ bước sóng 517 nm của mẫu chuẩn.
Amẫu thực nghiệm: Độ hấp phụ tại bước sóng 517 nm của mẫu thử nghiệm. + Hoạt tính chống oxi hóa của mẫu thử nghiệm được tính tương đương với
hàm lượng chất chuẩn là axit ascorbic (µg/ml) dựa theo phương trình đường chuẩn y = 0,09060x - 1,40376.
Hình 2.6. Phương trình đường chuẩn axit ascorbic