Chƣơng 3 KẾT QUẢ
3.2. Kết quả phân tích kiểu gen của SNP CYP2C9*3 và SNP rs9923231,
3.2.1. Kết quả tách chiết DNA tổng số
Mẫu máu của bệnh nhân được bảo quản và mang đến phòng xét nghiệm gen tại Khoa Y Dược - Đại học Quốc Gia Hà Nội. Tại đây chúng tơi thực hiện bước đầu tiên trong quy trình xác định kiểu gen của SNP CYP2C9*3 và SNP rs9923231, SNP rs9934438 trên gen VKORC1 là tách chiết DNA tổng số (DNA tổng số bao gồm:
DNA trong nhân và DNA trong ty thể được tách từ máu toàn phần). Bước tách chiết này là bước đầu tiên và cũng là quan trọng nhất để thu được DNA.
Để đánh giá được chất lượng DNA sau khi tách chiết từ mẫu máu chúng tôi cần kiểm tra kết quả thu được bằng cách đo OD (đánh giá định lượng) mẫu DNA vừa thu được bằng 2 cách:
- Kiểm tra chất lượng DNA tổng số bằng cách điện di trên gel agarose 0,7% với hiệu điện thế 100 V chạy trong 60 phút. Các mẫu có chất lượng tốt là các mẫu cho băng điện di sáng rõ, có một băng duy nhất tương ứng với băng 23.1 kb của Lambda DNA/HindIII Marker như hình 3.1 dưới đây.
Hình 3.1. Hình ảnh điện di DNA tổng số trên gel Agarose 0,7%
Làn M: Lambda DNA/HindIII Marker.
Các băng điện di lên sáng rõ, các mẫu DNA tổng số đều lên một băng điện di duy nhất (khơng có băng phụ), các băng điện di khơng bị đứt gãy, smear.
- Kiểm tra chất lượng DNA tổng số bằng cách đo quang sử dụng máy quang phổ đo thể tích nano-Nano photometer NP88 (quy trình giống với quy trình kiểm tra chất lượng DNA bằng phương pháp đo quang ở mục 2.4.3.2).
Bảng 3.2. Kết quả kiểm tra nồng độ và độ tinh sạch của DNA tổng số
Chỉ số ̅ SD
Nồng độ DNA (ng/µl) 110,99 47,67
A260/280 2,023 0,01
Các mẫu DNA tổng số trong nghiên cứu có nồng độ trung bình là: 110,99 ng/µl và có độ tinh sạch cao (tỉ lệ của độ hấp thụ ở bước sóng A260/280 trung bình là: 2,023). Điều này chứng tỏ rằng, tất cả các mẫu DNA tổng số thu được đủ tiêu chuẩn để tiếp tục sử dụng thực hiện phản ứng nhân dòng đoạn gen chứa SNP CYP2C9*3