CHƯƠNG 1 TỔNG QUAN TÀI LIỆU
2.4. PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU
2.4.1.2. Đông khô thử nghiệm vắc xin BCG trên ống 2ml đã xác định thông số kỹ
Ống 2ml có định vị bẻ được đã xác định được thông số kỹ thuật phù hợp với trang thiết bị hiện có tại IVAC: máy súc rửa Bausch+Strolbel, syringe Cornwall, máy hàn chân không Kumabe ES-1500. Chúng tôi tiến hành đông khô thử nghiệm 6 lô vắc xin BCG trên ống 2ml có định vị bẻ được. Sử dụng cùng một lơ vắc xin BCG bán thành phẩm, tách riêng 1 phần để phân liều và đơng khơ trên ống 2ml có định vị bẻ được (gọi là lơ thí nghiệm – TN). Mỗi lơ thí nghiệm (TN) đơng khơ 400 ống. Phần vắc xin BCG bán thành phẩm còn lại được thực hiện theo quy trình chuẩn sản xuất vắc xin BCG của IVAC (gọi là lô đối chứng - ĐC). Mỗi lô đối chứng (ĐC) khoảng 7000 ống.
Đơng khơ thử nghiệm 6 lơ thí nghiệm liên tiếp (TN1, TN2, TN3, TN4, TN5 và TN6) và 6 lô đối chứng tương ứng (ĐC1, ĐC2, ĐC3, ĐC4 và ĐC6). Các lơ thí nghiệm và lơ đối chứng được phân liều, đông khô và hàn ống trong cùng điều kiện.
Nhân chủng
Cấy chuyền sản xuất
Gặt, nghiền sinh khối
Pha chế vắc xin tƣơi
Phân ống 2ml có định vị bẻ đƣợc và khơng bẻ đƣợc Đơng khơ Hàn ống chân khơng Đóng gói Biệt trữ Chủng gốc 1173 P2 Lot C/WS
Sơ đồ qui trình sản xuất và kiểm định vắc xin BCG
Kiểm định
Hình 2.4. Sơ ồ quy trình sản xuất vắc xin BCG (Nguồn: Viện Vắc xin và Sinh phẩm y tế, 2020) [37].
Giai đoạn đông khô, hàn ống chân không - Độ sống tƣơi - Vô trùng tƣơi -Vô trùng -Mật độ quang -Độ phân tán -Vơ trùng
-An tồn đặc hiệu
Giai đoạn ni cấy, pha chế vắc xin tƣơi
Cảm quan, vơ trùng
Giai đoạn đóng gói thành phẩm Kiểm tra -Vô trùng -Nhận dạng -An tồn khơng đặc hiệu -Mật độ quang -Độ phân tán -Cảm quan -Độ ẩm tồn dƣ -Tốc độ tạo huyền dịch đồng nhất -Chân khơng -Độ sống -Ổn định nhiệt
Qui trình sản xuất vắc xin BCG
Nhân chủng (S1): Đưa BCG từ ống chủng sản xuất 1173 P2 lot C/WS vào môi trường Sauton, theo dõi 21 ngày ở nhiệt độ 37 ±1oC. Quan sát màng BCG khơ, có màu vàng nhạt, xếp đều đặn trên bề mặt bình Sauton. Tiến hành cấy chuyền sản xuất.
Cấy chuyền sản xuất (S2): Chuyền màng BCG từ bình S1 sang môi trường
Sauton. Tiêu chuẩn đánh giá trước khi gặt: màng BCG màu vàng tươi, mọc dày, xếp đều đặn trên bề mặt bình Sauton.
Gặt, pha chế vắc xin tươi: màng BCG (S2 ) sau 6-7 ngày trên môi trường
Sauton đạt tiêu chuẩn về cảm quan (màu sắc, độ leo), gặt thu sinh khối bằng bộ lọc Birkhaug. Đưa sinh khối vào nghiền và pha với Glutamate Natri 1,5% để có đậm độ 50mg/ml.
Pha bán thành phẩm: Vắc xin BCG được pha với tá chất Glutamat Natri 1,5%
để có đậm độ 2,5mg/ml
Phân ống: Quá trình phân ống được thực hiện theo qui trình chuẩn sản xuất
vắc xin BCG của IVAC, bằng bơm tiêm phân liều (Syringe Cornwall) đã được chuẩn định. Trong suốt quá trình phân ống vắc xin BCG phải được đặt lên trên máy khuấy từ và giữ ở nhiệt độ 2-8oC. Sau khi phân ống, dùng máy lắc đều để vắc xin BCG không bị lắng trước khi làm đông.
Đông khô: Vắc xin BCG được đưa vào đông khô trên máy đông khô CNME
với 2 giai đoạn làm đông và làm khô. Giai đoạn làm đông được thể hiện ở 2 cấp:
oLàm đông cấp I ở nhiệt độ -30oC trong 4 -6 giờ
oLàm đông cấp II ở -42oC, thời gian làm đông ≥ 8 giờ
• Tổng thời gian của giai đoạn làm đơng khơng được ít hơn 12 giờ và nhiệt độ sau cùng vắc xin BCG kết thúc giai đoạn làm đông là -38oC ± 2oC.
-Vắc xin BCG được làm khô trong điều kiện chân không và cũng được thực hiện 2 cấp:
oLàm khô cấp I (giai đoạn tách nước tự do): từ 4 - 5 giờ trong điều kiện chân không ≤ 20 Pa và nhiệt độ giàn ngưng tụ ≤ -50oC. Nhiệt độ vắc xin
trong giai đoạn này sẽ tăng dần, khi kết thúc giai đoạn làm khô cấp I, chân không trong buồng máy đông khô giảm xuống ≤ 6 Pa chuyển sang làm khô cấp II.
oLàm khô cấp II (giai đoạn tách nước liên kết): giai đoạn này nhiệt độ được kích hoạt tăng lên, nhiệt độ sau cùng của vắc xin tùy thuộc vào nhiệt độ này. Nhiệt độ sau cùng của vắc xin được xác định là nhiệt độ khi kết thúc q trình đơng khơ.
Hàn ống: Các ống vắc xin đưa vào hàn kín trên máy hàn chân không
KUMABE ES-1500. Tỉ lệ loại bỏ chân khơng lúc hàn khơng q 2%.
Đóng gói: Vắc xin BCG được kểm tra cảm quan, kiểm tra chân khơng trước
khi đóng hộp. Một hộp vắc xin chứa 20 ống, mỗi ống 10 liều.
Biệt trữ: Vắc xin BCG trước khi xuất xưởng được kiểm tra các chỉ tiêu: vô
trùng, nhận dạng, an tồn khơng đặc hiệu, mật độ quang, độ phân tán, cảm quan, độ ẩm tồn dư, tốc độ tạo huyền dịch đồng nhất, chân không, độ sống, ổn định nhiệt.
• Vắc xin BCG được bảo quản ở nhiệt độ 2-8oC, hạn dùng 30 tháng.
Đánh giá kết quả:
- Tất cả 6 lô vắc xin BCG thử nghiệm và 6 lô đối chứng được đánh giá chất lượng theo tiêu chuẩn xuất xưởng [10; 30].
- Thống kê tỷ lệ loại bỏ trong suốt quá trình sản xuất bao gồm: tỷ lệ phần trăm gãy vỡ trong quá trình súc rửa, hàn ống, kiểm tra vật lý, tỷ lệ loại do không đạt chân không. So sánh với tỷ lệ loại bỏ của ống sử dụng vật liệu tạo vết khứa để bẻ đang sử dụng hiện nay qua các giai đoạn.
2.4.2. Sản xuất thử nghiệm và giám sát chất lượng vắc xin BCG sảnxuất tr n ống 2ml có ịnh vị bẻ ược