Chỉ số Nhóm NC Protein (mean±SD) HCC (n=20) (1) 242,65 ± 50,36 LC (n=20) (2) 298,13 ± 116,95 CHB (n=20) (3) 285,08 ± 87,84 HC (n=20) (4) 243,55 ± 126,65 p p1-2 = 0,78 p1-3 = 0,09 p1-4 =0,97
Nhận xét: Mức độ biểu hiện của protein GP73 trên nhóm xơ gan (LC) là cao
nhất và thấp nhất là ở nhóm người khỏe mạnh (HC), tuy vậy khơng có sự khác biệt (p>0,05).
Hình 3.9: So sánh mức độ biểu hiện của protein GP73 giữa các nhóm nghiên cứu.
3.3.2.5. So sánh giá trị chẩn đoán của protein GP73 và AFP.
Nhận xét: Đường cong ROC được vẽ để xác định các giá trị cắt tối ưu và để
xác định độ nhạy và độ đặc hiệu của protein GP73 và AFP. Diện tích dưới đường cong AUROC của AFP 0,906 (95% CI = 0,815 – 0,996), tại giá trị điểm cắt AFP = 20,27 có độ nhạy 80%, độ đặc hiệu 100% trong chẩn đoán HCC. Protein GP73 ở giá trị điểm cắt protein GP73 = 253,46 có độ nhạy 35,3% và độ đặc hiệu 35,0% trong chẩn đoán HCC.
Phương pháp đầu tiên được sử dụng để phát hiện protein GP73 trong huyết tương là phương pháp bán định lượng Western blotting, phương pháp này rất tốn kém, lại tốn thời gian. Đã có nhiều nghiên cứu đánh giá mức độ biểu hiện gen GP73 thông qua protein sử dụng phương pháp ELISA. Block và cộng sự đầu tiên đã chứng minh mức độ biểu hiện protein GP73 huyết thanh tăng trên ung thư gan có HBV [7]. Một nghiên cứu khác của Marrero và cộng sự đã nghiên cứu và cho rằng mức độ biểu hiện của GP73 trong huyết thanh cao hơn đáng kể ở bệnh nhân HCC so với bệnh nhân xơ gan với độ nhạy là 62% và độ đặc hiệu là 71% trong khi đó AFP chỉ dưới 20 và 100ng/ml. Các tác giả đã báo cáo độ nhạy và độ đặc hiệu của GP73 là 69% và 75%, trong khi đó của AFP là 30% và 96%. Điều đó cho thấy ý nghĩa của GP73 trong chẩn đốn HCC ở những bệnh nhân bình thường và những bệnh nhân có AFP tăng nhẹ [48].
Hình 3.10: Đƣờng cong ROC của protein GP73 và AFP
Gu và cộng sự đã phát triển phương pháp Sandwich ELISA để xác định nồng độ protein GP73. Tác giả nghiên cứu trên tổng số 263 bệnh nhân trong đó 155 bệnh nhân bệnh gan (57 bệnh nhân viêm gan mạn tính, 69 bệnh nhân xơ gan, 29 bệnh nhân HCC), 36 bệnh nhân bị bệnh khác và 72 người khỏe mạnh, qua quá trình nghiên cứu tác giả cho thấy rằng nồng độ protein GP73 ở những bệnh nhân bị gan cao gấp 3 lần so với người khỏe mạnh. Tuy nhiên, nồng độ protein GP73 không khác biệt đáng kể giữa các nhóm bệnh gan. Hơn nữa, GP73 khơng cao hơn đáng kể ở những bệnh nhân bị bệnh khác ngoài gan so với người khỏe mạnh [20]. Một nghiên cứu khác của tác giả Ozkan H và cộng sự đã nghiên cứu mức độ biểu hiện của GP73 trên 3 nhóm bệnh nhân ung thư gan, xơ gan và người khỏe mạnh. Tác giả cho thấy nồng độ protein GP73 được tìm thấy trên huyết thanh của tất cả các bệnh nhân, tuy nhiên khi so sánh giữa các nhóm với nhau thì khơng có sự khác biệt và khơng có ý nghĩa thống kê (p = 0,373), và khi so sánh GP73 với AFP thì cho thấy GP73 có độ nhạy và độ đặc hiệu thấp hơn AFP [52]. Kết quả nghiên cứu của chúng tôi phù hợp với kết quả nghiên cứu của các tác giả này.
Để đánh giá mức độ biểu hiện protein GP73 chúng tôi sử dụng Kit Elisa để xác định nồng độ protein GP73 trong huyết tương của các nhóm bệnh nhân viêm gan và nhóm người khỏe mạnh. Đây là một phương pháp phổ biến hiện nay được sử dụng rộng rãi, với ưu điểm là nhanh, đơn giản, và khơng địi hỏi nhiều trang thiết bị hiện đại, đắt tiền. Kết quả nghiên cứu cho thấy mức độ biểu hiện protein GP73 giữa các nhóm bệnh gan và nhóm chứng người khỏe mạnh có khác nhau nhưng không đáng kể (p = 0,219). So sánh nồng độ protein GP73 giữa các nhóm bệnh nhân nghiên cứu cho thấy nồng độ protein GP73 ở các nhóm bệnh nhân bệnh gan đều cao hơn nhóm khỏe mạnh và cao nhất là ở nhóm xơ gan (LC), tuy vậy sự khác biệt này khơng có ý nghĩa thống kê với p>0,05. Đánh giá giá trị của GP73 so với AFP trong chẩn đoán ung thư gan chúng tơi thấy GP73 có độ nhạy và độ đặc hiệu thấp hơn AFP. Kết quả này một lần nữa khẳng định mặc dù mức độ biểu hiện của gen GP73 có tăng cao nhất trong nhóm bệnh nhân ung thư gan (mRNA) và xơ gan (protein) khi so với các nhóm bệnh gan khác do HBV và cao hơn so với nhóm khỏe mạnh
nhưng sự khác biệt khơng có ý nghĩa thống kê, p>0,05. Do vậy, liệu chăng giá trị chẩn đoán của GP73 cần phải được nghiên cứu thêm nữa để khẳng định vai trò và giá trị trong chẩn đoán HCC.
KẾT LUẬN VÀ KIẾN NGHỊ
KẾT LUẬN
Qua nghiên cứu tìm hiểu giá trị của mARN GP73 và protein GP73 trên các nhóm bệnh nhân nhiễm vi rút viêm gan B chúng tôi rút ra được một số kết luận sau: 1. Mức độ biểu hiện gen mARN GP73 và protein GP73 khơng có sự khác biệt
đáng kể giữa các nhóm nghiên cứu.
2. So sánh với AFP thì mARN GP73 và protein GP73 ít có giá trị trong chẩn đốn ung thư gan có HBV dương tính.
KIẾN NGHỊ
Mặc dù GP73 được đề xuất là một trong những dấu ấn phân tử cho chẩn đoán sớm ung thư gan đã được một số các tác giả nước ngồi cơng bố. Tuy nhiên nghiên cứu của chúng tôi trên một số lượng bệnh nhân còn hạn chế. Do vậy, để đánh giá chính xác vai trị của GP73 cần phải tiến hành nghiên cứu với quy mô lớn hơn. Đồng thời tiếp tục tìm kiếm các dấu ấn phân tử khác góp phần cho chẩn đốn sớm ung thư gan.
TÀI LIỆU THAM KHẢO
1. A H. S. R. a. A. L. (2000), "Tumours of the Liver and Intrahepatic Bile Ducts",
World Health Organization Classfication of Tumors, IARC press, pp. 158-202.
2. al A. H. e. (2012), "Development of Hepatocellular Carcinoma Associated with Anabolic Androgenic Steroid Abuse in a Young Bodybuilder: A Case Report",
Case Reports in Pathology, 2012.
3. al E. M. e. (2003), "Cancer risk in patients with hereditary hemochromatosis and in their first-degree relatives", Gastroenterology, 125(6), pp. 1733-1741.
4. al F. T. e. (2014), "Alcohol and liver cancer: a systematic review and meta-analysis of prospective studies", Annals of Oncology, 25, pp. 1526-1535.
5. Bagnardi V B. M., La Vecchia C et al. (2001), "A meta-analysis of alcohol drinking and cancer risk", Br J Cancer, 85, pp. 1700-1705.
6. Beillard E., Pallisgaard N., van der Velden V. H. et al. (2003), "Evaluation of candidate control genes for diagnosis and residual disease detection in leukemic patients using 'real-time' quantitative reverse-transcriptase polymerase chain reaction (RQ-PCR) - a Europe against cancer program", Leukemia, 17(12), pp.
2474-86.
7. Block TM C. M., Lowman M, Steel LF, Romano PR, Fimmel C, et al (2005), "Use of targeted glycoproteomics to identify serum glycoproteins that correlate with liver cancer in woodchucks and humans", Proc Natl Acad Sci USA, 102, pp. 779-784. 8. Bosch F. X., Ribes J., Diaz M. et al. (2004), "Primary liver cancer: worldwide
incidence and trends", Gastroenterology, 127(5 Suppl 1), pp. S5-S16.
9. Chen C. J., Yang H. I., Su J. et al. (2006), "Risk of hepatocellular carcinoma across a biological gradient of serum hepatitis B virus DNA level", JAMA, 295(1), pp. 65- 73.
10. Clark M. F., Adams A. N. (1977), "Characteristics of the microplate method of enzyme-linked immunosorbent assay for the detection of plant viruses", J Gen Virol, 34(3), pp. 475-83.
11. Claudio Pelucchi S. D. S. G., Sc.D.; Werner Garavello, M.D.; Cristina Bosetti, Sc.D.; and Carlo La Vecchia, M.D. (2006), "Cancer risk associated with alcohol and tobacco use: focus on upper aerdisgetive tract and liver", Health risks, 29(3),
pp. 193-198.
12. Diseases A. A. f. t. S. o. L. (2010), "Management of Hepatocellular Carcinoma: An Update", HEPATOLOGY, Vol. 000, No. 000, pp. 1-35.
13. Donati M., Brancato G., Donati A. (2010), "Clinical biomarkers in hepatocellular carcinoma (HCC)", Front Biosci (Schol Ed), 2, pp. 571-7.
14. Donato F T. A., Gelatti U, Parrinello G, Boffetta P, Albertini A, Decarli A, Trevisi P, Ribero ML, Martelli C, Porru S, Nardi G (2002), "Alcohol and hepatocellular carcinoma: the effect of lifetime intake and hepatitis virus infections in men and women.", Am J Epidemiol., 155(4), pp. 323-331.
15. Engvall E., Perlmann P. (1971), "Enzyme-linked immunosorbent assay (ELISA). Quantitative assay of immunoglobulin G", Immunochemistry, 8(9), pp. 871-4. 16. Fattovich G., Stroffolini T., Zagni I. et al. (2004), "Hepatocellular carcinoma in
17. Fimmel C. J., Wright L. (2009), "Golgi protein 73 as a biomarker of hepatocellular cancer: development of a quantitative serum assay and expression studies in hepatic and extrahepatic malignancies", Hepatology, 49(5), pp. 1421-3.
18. Forner A R. M., Bruix J (2009), "Alpha-fetoprotein for hepatocellular carcinoma diagnosis: the desmise of abrilliant star", Gastroenterology, 137.
19. Goh C. W. a. K. (2006), "Chronic hepatitis B infection and liver cancer", Biomed Imaging Interv J, 2(3).
20. Gu Y., Chen W., Zhao Y. et al. (2009), "Quantitative analysis of elevated serum Golgi protein-73 expression in patients with liver diseases", Ann Clin Biochem,
46(Pt 1), pp. 38-43.
21. Hashem B. El-Serag M. D., M.P.H. (2011), "Hepatocellular Carcinoma", The New England journal of medicine, 365, pp. 1118-1127.
22. Hayashi PH D. B. A. (2005), "The progression of hepatitis B- and C-infections to chronic liver disease and hepatocellular carcinoma: epidemiology and pathogenesis.", Med Clin North Am., 89(2), pp. 371-389.
23. HB. E.-S. (2001), "Epidemiology of hepatocellular carcinoma", Clin Liver Dis, 5,
pp. 87-107.
24. Hu J. S., Wu D. W., Liang S. et al. (2010), "GP73, a resident Golgi glycoprotein, is sensibility and specificity for hepatocellular carcinoma of diagnosis in a hepatitis B- endemic Asian population", Med Oncol, 27(2), pp. 339-45.
25. Iain H. McKillop L. W. S. (2005), "Alcohol and liver cancer", Alcohol, 35, pp. 195- 203.
26. Iftikhar R., Kladney R. D., Havlioglu N. et al. (2004), "Disease- and cell-specific expression of GP73 in human liver disease", Am J Gastroenterol, 99(6), pp. 1087- 95.
27. Iloeje U. H., Yang H. I., Su J. et al. (2006), "Predicting cirrhosis risk based on the level of circulating hepatitis B viral load", Gastroenterology, 130(3), pp. 678-86. 28. J F., I S., M E. et al. (2013), "GLOBOCAN 2012 cancer incidence and mortality
worldwide: IARC cancerbase", International Agency for Research on Cancer, 11. 29. Jordi Bruix M. S. (2010), "Management of Hepatocellular Carcinoma: An Update",
AASLD PRACTICE GUIDELINE, HEPATOLOGY, Vol. 000, No. 000, 2010.
30. Kang J. E., Hwang S. H., Lee J. H. et al. (2011), "Effects of RBC removal and TRIzol of peripheral blood samples on RNA stability", Clin Chim Acta, 412(19-20), pp. 1883-5.
31. Kladney R. D., Bulla G. A., Guo L. et al. (2000), "GP73, a novel Golgi-localized protein upregulated by viral infection", Gene, 249(1-2), pp. 53-65.
32. Kladney R. D., Cui X., Bulla G. A. et al. (2002), "Expression of GP73, a resident Golgi membrane protein, in viral and nonviral liver disease", Hepatology, 35(6), pp. 1431-40.
33. Kladney R. D., Tollefson A. E., Wold W. S. et al. (2002), "Upregulation of the Golgi protein GP73 by adenovirus infection requires the E1A CtBP interaction domain", Virology, 301(2), pp. 236-46.
34. Ko SC F. L., Smith EA, Fenlon N, Koneru AK, Murphy TV (2014), "Estimated Annual Perinatal Hepatitis B Virus Infections in the United States, 2000-2009", J Pediatric Infect Dis Soc.
35. Kumada T., Toyoda H., Kiriyama S. et al. (2010), "Incidence of hepatocellular carcinoma in patients with chronic hepatitis B virus infection who have normal
36. La Vecchia C N. E., Cavalieri d’Oro L et al. (1998), "Liver cirrhosis and the risk of primary liver cancer", Eur J Cancer Prev, 7, pp. 315-320.
37. Larsson SC W. A. (2007), "Overweight, obesity and risk of liver cancer: a meta- analysis of cohort studies", Br J Cancer, 97(1005-1008).
38. Liu Y C. C., Marsh GM, Wu F (2012), "Population attributable risk of aflatoxin- related liver cancer: systematic review and meta-analysis", Eur J Cancer Prev,
48(14), pp. 2125-2136.
39. Livak K. J., Schmittgen T. D. (2001), "Analysis of relative gene expression data using real-time quantitative PCR and the 2(-Delta Delta C(T)) Method", Methods,
25(4), pp. 402-8.
40. LONDON W. T. A. M., K.A. (1996), "Liver cancer", Cancer Epidemiology and Prevention, pp. 772-793.
41. Luis Jesuino de Oliveria Andrade A. D. O., Junior, Rosangela Carvalho Melo,1 Emmanuel Conrado De Souza,1 Carolina Alves Costa Silva, and Raymundo Paraná (2009), "Association Between Hepatitis C and Hepatocellular Carcinoma", J Glob Infect Dis., 1(1), pp. 33-37.
42. Maitra A., Thuluvath P. J. (2004), "GP73 and liver disease: a (Golgi) complex enigma", Am J Gastroenterol, 99(6), pp. 1096-8.
43. Malaguarnera G., Giordano M., Paladina I. et al. (2010), "Serum markers of hepatocellular carcinoma", Dig Dis Sci, 55(10), pp. 2744-55.
44. Manno M., Camma C., Schepis F. et al. (2004), "Natural history of chronic HBV carriers in northern Italy: morbidity and mortality after 30 years", Gastroenterology, 127(3), pp. 756-63.
45. Mao Y., Yang H., Xu H. et al. (2010), "Golgi protein 73 (GOLPH2) is a valuable serum marker for hepatocellular carcinoma", Gut, 59(12), pp. 1687-93.
46. Mao Y. L., Yang H. Y., Xu H. F. et al. (2008), "[Significance of Golgi glycoprotein 73, a new tumor marker in diagnosis of hepatocellular carcinoma: a primary study]", Zhonghua Yi Xue Za Zhi, 88(14), pp. 948-51.
47. Marcello Donati G. B., Angelo Donati (2010), "Clinical biomarkers in hepatocellular carcinoma", Frontiers in Bioscience S2, pp. 571-577.
48. Marrero J. A., Romano P. R., Nikolaeva O. et al. (2005), "GP73, a resident Golgi glycoprotein, is a novel serum marker for hepatocellular carcinoma", J Hepatol,
43(6), pp. 1007-12.
49. McMahon B. J., Alberts S. R., Wainwright R. B. et al. (1990), "Hepatitis B-related sequelae. Prospective study in 1400 hepatitis B surface antigen-positive Alaska native carriers", Arch Intern Med, 150(5), pp. 1051-4.
50. Mizuguchi T., Katsuramaki T., Nobuoka T. et al. (2004), "Serum hyaluronate level for predicting subclinical liver dysfunction after hepatectomy", World J Surg,
28(10), pp. 971-6.
51. Nguyen V. T., Law M. G., Dore G. J. (2008), "An enormous hepatitis B virus- related liver disease burden projected in Vietnam by 2025", Liver Int, 28(4), pp.
525-31.
52. Ozkan H., Erdal H., Tutkak H. et al. (2011), "Diagnostic and prognostic validity of Golgi protein 73 in hepatocellular carcinoma", Digestion, 83(1-2), pp. 83-8.
53. Pilia G., Hughes-Benzie R. M., MacKenzie A. et al. (1996), "Mutations in GPC3, a glypican gene, cause the Simpson-Golabi-Behmel overgrowth syndrome", Nat Genet, 12(3), pp. 241-7.
54. Sangiovanni A D. N. E., Fasani P, De Fazio C, Ronchi G, Romeo R, Morabito A, De Franchis R, Colombo M (2004), "Increased survival of cirrhotic patients with a hepatocellular carcinoma detected during surveillance.", Gastroenterology, 126(4),
pp. 1005-1014.
55. Sherlock S., Fox R. A., Niazi S. P. et al. (1970), "Chronic liver disease and primary liver-cell cancer with hepatitis-associated (Australia) antigen in serum", Lancet,
1(7659), pp. 1243-7.
56. Shi Y., Chen J., Li L. et al. (2011), "A study of diagnostic value of golgi protein GP73 and its genetic assay in primary hepatic carcinoma", Technol Cancer Res Treat, 10(3), pp. 287-94.
57. Van Weemen B. K., Schuurs A. H. (1971), "Immunoassay using antigen-enzyme conjugates", FEBS Lett, 15(3), pp. 232-236.
58. Wang Y W. B., Shen F et al. (2012), "Body mass index and risk of primary liver cancer: a meta-analysis of prospective studies", Oncologist, 17, pp. 1461-1468. 59. WHO (2015), "Hepatitis B".
60. WHO (2015), "Hepatitis C".
61. Willyard C. (2007), "Researchers look for 'sweet' method to diagnose cancer", Nat Med, 13(11), pp. 1267.
62. Wright L. M., Huster D., Lutsenko S. et al. (2009), "Hepatocyte GP73 expression in Wilson disease", J Hepatol, 51(3), pp. 557-64.
63. Wright L. M., Yong S., Picken M. M. et al. (2009), "Decreased survival and hepato- renal pathology in mice with C-terminally truncated GP73 (GOLPH2)", Int J Clin Exp Pathol, 2(1), pp. 34-47.
64. Wu F. S., Zheng S. S., Wu L. J. et al. (2006), "[Study on the prognostic value of hepatocyte growth factor and c-met for patients with hepatocellular carcinoma]",
Zhonghua Wai Ke Za Zhi, 44(9), pp. 603-8.
65. Zhou Y., Yin X., Ying J. et al. (2012), "Golgi protein 73 versus alpha-fetoprotein as a biomarker for hepatocellular carcinoma: a diagnostic meta-analysis", BMC Cancer, 12, pp. 17.
66. Zhu Z. W., Friess H., Wang L. et al. (2001), "Enhanced glypican-3 expression differentiates the majority of hepatocellular carcinomas from benign hepatic disorders", Gut, 48(4), pp. 558-64.
PHỤ LỤC: DANH SÁCH BỆNH NHÂN NGHIÊN CỨU VÀ KẾT QUẢ mRNA GP73 & PROTEIN GP73
STT Họ tên Mã bệnh Tuổi Giới Ct mRNA GP73 Ct ABL Protein GP73
1 Nguyễn Tiến Đ HCC 45 Nam 40,3328 35,3696 172,977