Hỡnh ảnh điện di phõn tớch kiểu gen 4 locut F13A01, D8S1179,

gen 4 locut F13A01, D8S1179, Amelogenin và HPRTB.

* LD: Thang alen chỉ thị chuẩn; B: mẫu người bố nghi vấn; C : mẫu người con; M: mẫu người mẹ; (-) : mẫu đối chứng õm; (+) : mẫu đối chứng dương.

a b c Locut F13A01 D8S1179 Amelogenin HPRTB (-) B LD C M LD + 8 3.2 18 8 16 11 (-) (+) LD B C LD M

Kết quả phõn tớch kiểu gen thu được như sau:

Bảng 3.10. Kết quả phõn tớch kiểu gen 16 locut mẫu (B), (C) và (M)

Mẫu Locut Bố (nghi vấn) (B) Con (C) Mẹ (M) D5S818 10 11 11 11 10 11 D7S820 8 11 9 11 8 9 D13S317 11 11 8 11 8 8 CSF1PO 12 12 11 12 9 11 TPOX 8 9 8 9 8 9 TH01 6 7 6 7 7 9 D16S539 10 11 9 10 9 12 D3S1358 14 15 15 16 15 16 vWA 16 16 16 18 14 18 FES/FPS 10 11 10 13 11 13 F13B 9 9 8 9 8 8 LPL 10 12 10 10 10 10 F13A01 6 6 4 6 4 7 D8S1179 10 16 11 16 10 11 Amelogenin X Y X X X X HPRTB 12 12 13 13 14

Theo kết quả phõn tớch kiểu gen, người cha đẻ của mẫu C phải cú cỏc alen bắt buộc ở cỏc locut như sau: Alen 11 (locut D5S818); alen 11 (locut D7S820); alen 11 (locut D13S317); alen 12 (locut CSF1PO); alen 8 hoặc 9 (locut TPOX); alen 6 (locut TH01); alen 10 (locut D16S539); alen 15 hoặc 16 (locut D3S1358); alen 16 (locut vWA); alen 10 (locut FES/FPS); alen 9 (locut F13B); alen 10 (locut LPL); alen 6 (locut F13A01) và alen 16 (locut D8S1179), alen 12 (locut HPRTB). Trong trường hợp này, mẫu B (Bố - nghi vấn) cú đủ cỏc alen bắt buộc ở tất cả cỏc locut.

Sử dụng dữ liệu tần suất alen đó khảo sỏt được cho cỏc locut STR, chỳng tụi đó tớnh toỏn chỉ số CPI cũng như độ tin cậy quan hệ huyết thống. Kết quả tớnh toỏn cho thấy hai mẫu B và C cú quan hệ huyết thống cha con với xỏc suất > 99,9999%.

KẾT LUẬN

1. Đó nghiờn cứu xõy dựng được tổ hợp xỏc định 4 locut đa hỡnh STR mới bao gồm F13A01, D8S1179, HPRTB và Amelogenin, cụ thể :

- Đó thiết kế được cỏc cặp mồi cho phộp nhõn bội đặc hiệu cỏc locut đa hỡnh F13A01, D8S1179 và HPRTB và Amelogenin trong cựng một phản ứng PCR.

- Đó lựa chọn thành phần và điều kiện PCR thớch hợp cho phức 4 locut F13A01, D8S1179, HPRTB và Amelogenin : Nồng độ mồi của 4 locut là 0,8M mồi locut F13A01, 0,8M mồi locut D8S1179, 0,4M mồi locut Amelogenin và 0,8M mồi locut HPRTB; nồng độ dNTP 400

M; nồng độ MgCl2 2mM; Taq ADN-polymerase 2U; ADN khuụn 1ng

- 5ng (trong tổng thể tớch 25l) ; nhiệt độ gắn mồi là 60oC.

2. Đó điều tra, khảo sỏt để bổ sung số liệu về tần suất alen 15 locut đa hỡnh người Việt (Kinh), trong đú khảo sỏt mới 07 alen của locut F13A01, 06 alen của locut HPRTB, 06 alen của locut F13B, 08 alen của locut FES/FPS và 05 alen của locut LPL; phỏt hiện thờm được 02 alen mới ở quần thể người Việt (Kinh) là alen số 8 của locut CSF1PO, alen số 13 của locut vWA.

3. Đó xõy dựng thang alen chỉ thị chuẩn cho 4 locut. Thang alen chỉ thị của locut F13A01 bao gồm 06 alen (3.2, 4, 5, 6, 7, 8 ). Thang alen chỉ thị của locut D8S1179 bao gồm 11 alen (8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18). Thang alen chỉ thị của locut Amelogenin bao gồm 02 alen kớch thước tương ứng 212bp và 218bp. Thang alen chỉ thị của locut HPRTB bao gồm 06 alen (11, 12, 13, 14, 15, 16)

4. Kết quả nghiờn cứu đó chỉ ra cỏc locut phự hợp với truy nguyờn cỏ thể và xỏc định huyết thống ở Việt Nam là:

- Trong truy nguyờn cỏ thể: sử dụng 9 - 16 locut, trong đú ưu tiờn lựa chọn với 9 locut D5S818, D7S820, D13S317, CSF1PO, TPOX, TH01, D16S539, D3S1358, vWA.

- Trong phõn tớch giỏm định huyết thống: Sử dụng 16 locut D5S818, D7S820, D13S317, CSF1PO, TPOX, TH01, D16S539, D3S1358, vWA, F13B, FES/FPS, LPL, F13A01, D8S1179, Amelogenin và HPRTB.

5. Đó ứng dụng kết quả sản xuất bộ kit nhõn bội ADN phức 4 locut (F13A01, D8S1179, Amelogenin và HPRTB) và tớnh toỏn độ tin cậy trong phõn tớch nhận dạng cỏ thể người và xỏc định huyết thống ở người Việt. Đó chuyển giao bộ kit đến một số cơ sở giỏm định địa phương và được đỏnh giỏ sử dụng cú hiệu quả tốt.

KIẾN NGHỊ

Trong khuụn khổ của luận ỏn này, chỳng tụi đó nghiờn cứu xõy dựng được tổ hợp 4 locut đa hỡnh mới đồng thời khảo sỏt tần suất alen 15 locut đa hỡnh STR ở quần thể người Việt (Kinh). Trong thời gian tới, chỳng tụi cú kiến nghị cần nghiờn cứu và khảo sỏt bổ sung cỏc locut ADN đa hỡnh ở cỏc nhúm người thuộc cỏc dõn tộc khỏc nhau trờn lónh thổ Việt Nam để xõy dựng được bảng phõn bố tần suất cỏc alen phục vụ giỏm định, nhận dạng cỏ thể.