1.3 .TỔNG HỢP AURONE
1.3.3 .Tổng hợp aurone từ chalcone
1.3.3.1. Tổng hợp tiền chất chalcone
Phản ứng tổng hợp chalcone dựa trên cơ sở của phản ứng ngưng tụ Claisen – Schmidt[104, 105, 106]. Tuy nhiên, việc sử dụng xúc tác cho phản ứng là rất đa
dạng. Ngày nay, nhiều nghiên cứu tổng hợp chalcone đã chú ý đến những xúc tác cĩ thể tái sử dụng nhằm làm giảm ơ nhiễm mơi trường và giảm chi phí xử lý[107].
Hình 36 Cơ chế tổng hợp chalcone theo phương pháp thơng thường
Dựa trên sơ đồ phản ứng ta thấy, nếu trong phân tử acetophenone (61) cĩ
chứa nhĩm thế 4-hydroxyl với xúc tác base càng làm tăng tính nucleophile của acetophenone (62) tạo điều kiện thuận lợi tấn cơng vào nhĩm carbonyl của
benzaldehyde (63) để tạo chalcone (64). Trái lại, nếu trong phân tử của
benzaldehyde chứa nhĩm 4-hydroxyl, dưới xúc tác base làm giảm hoạt động của
hợp phần benzaldehyde (65) do tạo anion delocalized (66) (Hình 37).
Hình 37 Dạng anion delocalized của hợp phần benzaldehyde
Vì vậy, để tổng hợp hydroxychalcone (67) thì việc bảo vệ nhĩm hydroxyl là cần thiết khi dùng xúc tác base. Ngồi ra, phản ứng cịn thực hiện với xúc tác acid. Theo M.R.Jayapal [108], sử dụng SOCl2 thay thế khí HCl trong q trình ngưng tụ (HCl tạo ra trực tiếp bằng phản ứng của SOCl2 với ethanol tuyệt đối) (Hình 38).
Hình 38 Sơ đồ tổng hợp dẫn xuất chalcone thế 4-hydroxy theo M.R.Jayapal
Tổng hợp chalcone theo phương pháp thơng thường cũng thu được kết quả tương đối ổn định tuy nhiên phản ứng địi hỏi nhiều thời gian (12- 18h) và phức tap.
Đã cĩ nhiều nghiên cứu cho việc thay thế tác nhân phản ứng cũng như xúc tác nhằm
mang lại hiệu quả tổng hợp, chẳng hạn như Xiaoming Zeng và cộng sự [109] đã thay hợp phần benzaldehyde bởi Benzylamines (69) với xúc tác là muối ammonium
persulfate (70) trong dung mơi tert-Amyl alcohol mang lại một chalcone (71) hiệu suất 94 - 95% (Hình 39). Ngồi ra, đã cĩ nhiều cơng bố cho việc tổng hợp chalcone bằng cách sử dụng xúc tác nano[107], đặc biệt là dùng sĩng siêu âm [110, 111], phản ứng diễn ra nhanh chĩng (10 phút), đơn giản, thiết thực và hiệu quả cao.
Hình 39 Sơ đồ tổng hợp chalcone 71 theo Xiaoming Zeng
1.3.3.2. Các phương pháp tổng hợp aurone từ chalcone
Tổng hợp aurone từ việc đĩng vịng chalcone được thực hiện trong các điều kiện khác nhau. Haruo Sekizaki đã thực hiện phản ứng với xúc tác thủy ngân (II)
acetate trong acid acetic thu được các aurone tương ứng với hiệu suất từ 28- 62%
[112]. Đã cĩ những cải tiến mang lại hiệu suất cao hơn 77 - 87% bằng cách thay đổi bởi dung mơi pyridine [48, 113, 114, 115, 116].
Anastasia Detsi và cộng sự đã tổng hợp aureusidin từ chalcone qua hai bước
đã mang lại hiệu suất 46,5% theo sơ đồ Hình 40.
Hình 40 Sơ đồ tổng hợp aureusidin theo Anastasia Detsi
Mặc dù việc tổng hợp aurone từ chalcone sử dụng Hg(OAc)2 trong pyridine cĩ nâng cao hiệu suất, tuy nhiên sử dụng thủy ngân (II) acetate gây ra các vấn đề
ngộ độc, đặc biệt là đối với mơi trường. Một phương pháp tổng hợp khác bằng cách sử dụng hợp chất Thallium(III)nitrate (TTN) trong mơi trường acid và dung mơi là
MeOH. Phương pháp này cho hiệu suất trung bình 43 - 79%. Tuy nhiên, sự cần thiết phải cĩ sự hiện diện của một nhĩm đẩy electron ở vị trí 5' của chalcone (vị trí
para với nhĩm 2'-hydroxyl) và trong thời gian phản ứng, một nhĩm methoxy từ
dung mơi lại gắn vào vị trí 4 của sản phẩm aurone thu được, điều này gĩp phần hạn chế đáng kể khả năng tổng hợp liên quan đến phương pháp này (hình 41)[117, 118, 119]
Hình 41 Sơ đồ tổng hợp aurone từ chalcone sử dụng TTN/ MeOH
Để cải thiện điều này, Bose G. và cộng sự[120] đã thay bằng n-
tetrabutylammonium tribromide (TBATB). Quá trình diễn ra như sau (Hình 42)
O R OAc R4 R6 73 R, R4,R6: H, OMe, OBn O R OAc R4 R6 74 R R4 R6 75 TBATB (1:2eq) CH2Cl2/MeOH (5/2) CaCO3,0-50C 75-85% MeO 0,2M KOH EtOH/H2O (4/1) 0-50C 85-95% O Br O
Hình 42 Sơ đồ tổng hợp aurone theo Gopal Bose
Hợp chất 2’-acetoxychalcone (73) được brom hĩa chọn lọc tại vị trí α của
nhĩm carboxyl nhờ xúc tác TBATB với sự cĩ mặt của CaCO3 trong CH2Cl2/MeOH (5/2) kèm theo là sự tấn cơng của methoxy từ dung mơi tại vị trí β sinh ra sản phẩm
74. Xử lý hợp chất này bởi KOH trong EtOH/H2O (4/1), nhĩm 2’-acetoxy sẽ bị thủy
phân tạo phenolate, thuận lợi cho việc đĩng vịng, đồng thời tách loại phân tử
CHƯƠNG 2- VẬT LIỆU VÀ PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU
2.1. PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU 2.1.1. Phương pháp phân lập các hợp chất 2.1.1. Phương pháp phân lập các hợp chất
Sắc ký lớp mỏng (TLC)
Sắc ký lớp mỏng được thực hiện với bản mỏng tráng sẵn DC-Alufolien 60 F254(Merck 1,05715), RP18F254s (Merck). Phát hiện vệt chất bằng đèn tử ngoại ở hai bước sĩng 254 nm và 365 nm hoặc dùng thuốc thử là dung dịch ceri sulfat trong acid H2SO4, sấy khơ rồi hơ nĩng từ từ trên bếp điện đến khi hiện màu.
Sắc ký lớp mỏng điều chế
Sắc ký lớp mỏng điều chế thực hiện trên bản mỏng tráng sẵn silica gel 60G
F254 (Merck 1,05875), phát hiện vệt chất bằng đè tử ngoại ở hai bước sĩng 254 nm và 365 nm, hoặc cắt rìa bản mỏng để phun thuốc thử là dung dịch H2SO4 10%, hơ nĩng để phát hiện vệt chất; ghép lại bản mỏng như cũ để xác định vùng chất; sau đĩ cạo lớp Silica gel cĩ chất, giải hấp phụ và tinh chế lại bằng cách kết tinh trong dung mơi thích hợp.
Sắc ký cột (CC)
Sắc ký cột được tiến hành với chất hấp phụ là Silica gel pha thường và pha đảo. Silica gel pha thường cĩ cỡ hạt 0,040-0,063 mm (240-430 mesh). Silica gel
pha đảo YMC RP-18 (30- 50 µm, FuJisilisa Chemical Ltd.). Nhựa trao đổi ion
Diaion HP-20 ((Misubishi Chem. Ind. Co., Ltd.). Sắc lý lỏng cao áp (HPLC)
Sắc ký lỏng cao áp Agilent technologies 1200 Series của Viện Hĩa sinh biển, Viện Hàn lâm Khoa học và Cơng nghệ Việt Nam.
2.1.2. Phương pháp tổng hợp và tinh chế sản phẩm
- Các phản ứng được thực hiện bằng các phương pháp tổng hợp hữu cơ cơ
pháp glucosyl hĩa ... Ngồi ra cịn sử dụng một số phương pháp tổng hợp hữu cơ
đặc thù như: phản ứng Houben - Hoesch, phản ứng ngưng tụ Claisen - Schmidt...
- Phương pháp sắc ký lớp mỏng được sử dụng để giám sát tiến trình xảy ra
của các phản ứng hĩa học và phân tích chất lượng sản phẩm của phản ứng.
- Các hợp chất sau phản ứng được phân lập và tinh chế bằng các phương
pháp chiết, phương pháp sắc ký cột, phương pháp kết tinh,...
- Tất cả các hĩa chất dùng trong quá trình tổng hợp được mua từ các hãng: Sigma Aldrich, Merck và sử dụng mà khơng cần tinh chế lại.
- Các dung mơi sử dụng được cất lại hoặc làm khan theo điều kiện phản ứng.
2.1.3. Phương pháp xác định cấu trúc hĩa học
Phương pháp chung để xác định cấu trúc hố học của các hợp chất là sự kết hợp xác định giữa các thơng số vật lý với các phương pháp phổ hiện đại bao gồm:
Phổ hồng ngoại (FT-IR) được đo bằng máy NICOLET IMPACT-410
FTIR của hãng Carl Zeiss Jena (Đức) tại Viện Hĩa học – Viện Khoa học và Cơng nghệ Việt Nam.
Phổ khối lượng (ESI-MS) được ghi trên máy Agilent 6310 ion trap tại
Viện Hĩa học các hợp chất thiên nhiên – Viện Hàn lâm Khoa học và Cơng nghệ Việt Nam.
Phổ cộng hưởng từ hạt nhân (NMR) 1 chiều và 2 chiều sử dụng chất
nội chuẩn là TMS (δ = 0ppm), dung mơi CDCl3hoặc DMSO-d6được
ghi trên máy Bruker AM500 FT-NMR của Viện Hố học, Viện Hàn lâm Khoa học và Cơng nghệ Việt Nam ở tần số 500,13 MHz cho phổ
1H-NMR và ở tần số 125,76 MHz cho phổ 13C-NMR. Cấu trúc của các
hợp chất được xác định bằng sự kết hợp các phương pháp phổ và so
2.1.4. Khảo sát hoạt tính độc tế bào của các chất tổng hợp được. Vật liệu nghiên cứu Vật liệu nghiên cứu
Hố chất: Các aurone tổng hợp: Chất 55, chất 56, chất 76, chất 77, chất 78, chất 80,
chất 81
Các hĩa chất cần thiết khác của các hãng Sigma, GIBCO, Invitrogen v.v.
Các dịng tế bào ung thư: do GS. TS. J. M. Pezzuto, Trường Đại học Hawaii và
GS. Jeanette Maier, trường Đại học Milan, Italia cung cấp..
Phương pháp nghiên cứu
Phương pháp nuơi cấy tế bào in vitro
Các dịng tế bào ung thư được nuơi cấy dưới dạng đơn lớp trong mơi trường nuơi cấy DMEM với thành phần kèm theo gồm 2 mM L-glutamine, 10 mM HEPES, và 1,0 mM sodium pyruvate, ngồi ra bổ sung 10% fetal bovine serum – FBS (GIBCO).
Tế bào được cấy chuyển sau 3-5 ngày với tỉ lệ (1:3) và nuơi trong tủ ấm CO2 ở
CHƯƠNG 3: THỰC NGHIỆM
3.1. TỔNG HỢP MỘT SỐ AURONE
Các aurone đã được tổng hợp theo phương pháp phổ biến nhất là ngưng tụ
giữa các benzofuranone với các benzaldehyde. Chất trung gian chìa khĩa 3,4- dihydroxybenzofuranone (5b) khơng sẵn cĩ trên thương mại đã được nghiên cứu
tổng hợp theo 2 phương pháp từ phloroglucinol một hợp chất sẵn cĩ trong thương mại. Các aurone cũng được nghiên cứu tổng hợp theo các phương pháp khác nhau
để thu được các hydroxyaurone (chất 56, chất 76); các methoxyaurone (chất 55,
chất 77); các aurone với nhĩm thế methoxy ở vịng A và nhĩm thế hydroxyl ở vịng B (chất 80, chất 81); các aurone với nhĩm thế hydroxy ở vịng A và nhĩm thế
methoxy ở vịng B (chất 78, chất 79) (Hình 43). Sơ đồ phản ứng:
Hình 43 : Sơ đồ tổng hợp các aurone cĩ các nhĩm thế khác nhau.
a. ClCH2CN, Et2O, ZnCl2, HCl 0°C, 24 h; b. 1) HCl, hồi lưu; 2) MeONa/MeOH, hồi lưu (Hiệu suất a, b: 46%); c. H2O, hồi lưu (Hiệu suất a, c: 41%); d. MeI/K2CO3 (69,5% - 77%); e. 3,4-dihydrobenzaldehyde hoặc 4-hydroxybenzaldehyde, HCl/MeOH (52-
65%);g. 3,4-dimethoxybenzaldehyde hoặc 4-methoxybenzaldehyde, HCl/MeOH hoặc NaOH/MeOH, (74 %-72%) ;h. 3,4-dimethoxybenzaldehyde hoặc 4-methoxybenzaldehyde, HCl/MeOH hoặc NaOH/MeOH, (89% - 93%); m. 3,4-dihydrobenzaldehyde hoặc 4- hydroxybenzaldehyde, HCl/MeOH (64%-77%).
3.1.1. Tổng hợp chất trung gian chìa khĩa 4,6-dihyroxybenzofuran-3(2H)-one (5b)
Chất trung gian chìa khĩa benzofuranone 5b đã được nghiên cứu tổng hợp theo 2 phương pháp:
Phương pháp 1
Trong bình cầu 3 cổ được lắp sinh hàn, bơm hút chân khơng và nạp đầy khí N2 cho hỗn hợp của phloroglucinol (25,2 g; 0,2 mol) trong diethyl ether khan (500 mL) được làm lạnh đến 00C. Hỗn hợp chloroacetonitrile (15,1 g; 0,2 mol) và ZnCl2 (2,7 g; 0,02 mol) được nạp thêm vào bình phản ứng. Sục khí HCl vào hỗn hợp phản
ứng trong 2 h ở 00C. Hỗn hợp phản ứng được tiếp tục khuấy qua đêm. Sau đĩ lọc,
rửa kết tủa với diethyl ether và sấy khơ trong chân khơng, thu được chất rắn (3). Hợp chất 3 được hịa tan trong nước nĩng (500 mL) và đun hồi lưu trong 7 h. Sau đĩ, hỗn hợp này được làm lạnh xuống nhiệt độ phịng. Các kết tủa trắng được thu
thập bằng cách lọc, rửa sạch bằng nước và sấy khơ trong chân khơng thu được 5b (21,2 g, 65%).
Phương pháp 2
Trong bình cầu 3 cổ được lắp sinh hàn, bơm hút chân khơng và nạp đầy khí N2 cho hỗn hợp của phloroglucinol (25,2 g; 0,2 mol) trong diethyl ether khan (500 mL ) được làm lạnh đến 00C. Hỗn hợp chloroacetonitrile (15,1 g; 0,2 mol) và ZnCl2 (2,7 g; 0,02 mol) được nạp thêm vào bình phản ứng. Sục khí HCl vào hỗn hợp phản
ứng trong 2 h ở 00C. Hỗn hợp phản ứng được tiếp tục khuấy qua đêm. Sau đĩ lọc,
rửa kết tủa với diethyl ether và sấy khơ trong chân khơng, thu được 30,6 g muối iminium (3). Muối iminium 3 được hịa tan trong dung dịch HCl 1N (643 mL),
khuấy ở nhiệt độ phịng trong 3 h (xuất hiện kết tủa trắng) và sau đĩ đun hồi lưu
trong 2 h. Hỗn hợp này được làm lạnh xuống 6oC qua đêm. Các kết tủa thu được bằng cách lọc, rửa sạch với nước lạnh, sấy khơ trong chân khơng và hịa tan trong dung dịch MeONa/MeOH 1,8 M (195 mL). Dung dịch thu được được đun hồi lưu trong 2 h, sau đĩ làm lạnh xuống nhiệt độ phịng và trung hịa với dung dịch HCl
1N (22 mL). Cất loại methanol, phần cịn lại được chiết với ethyl acetate (40 mL). Dịch chiết được rửa lại bằng nước và làm khan bằng Na2SO4. Cất loại dung mơi thu
Chất 3 T0n/c: 239-232 oC 1H-NMR (DMSO-d6): δ (ppm) 12,60 , 11,02 , 9,86 (3H, br s, 2 × s, 3 × OH), 6,33 , 6,08 (2H, 2 × d, J = 1,5 Hz, H-3, H-5), 5,44 (2H, s, CH2). 13C-NMR (DMSO-d6): δ (ppm) 175,9, 173,6, 173,0, 160,6 (Ph C-2, C-4, C-6, C=NH2+), 99,41 (Ph C-1), 97,13 , 90,14, (Ph C-3, C-5), 75,35 (CH2). Chất 5b T0n/c: 252-254oC; 1H-NMR (500 MHz, DMSO-d6): δ (ppm) 10,54 (2H, br s, OH), 5,91(2H, s, H-5, H-7), 4,55 (2H, s, C-2). 13C-NMR(125 MHz, DMSO-d6): δ (ppm) 194,0 (C=O), 175,6 , 167,6 , 157,5 (C-4, C-6, C-8), 102,7 , 96,2 , 90,1(C-5, C-7, C-9), 74,8 (C-2). Tổng hợp 4,6-dimethoxybenzofuran-3(2H)-one (18)
Trong bình cầu 3 cổ được lắp sinh hàn, bơm hút chân khơng và nạp đầy khí N2 cho hỗn hợp 4,6-dihydroxybenzofuran-3(2H)-one (5b, 10 mmol) trong DMF (30 mL) và K2CO3 (20 mmol), cho tiếp từ từ methyl iodide (30 mmol) vào hỗn hợp và
được đun ở 80oC trong 1 giờ. Nước đá đã được thêm vào hỗn hợp phản ứng. Dung dịch được chiết với EtOAc. Dịch chiết EtOAc được làm khan bởi Na2SO4 sau đĩ cất dưới áp suất giảm loại dung mơi. Cặn chiết được kết tinh trong hỗn hợp của n-
hexane / EtOAc thu được dimethoxybenzofuranone 18 với hiệu suất 77%, sản phẩm là một chất rắn màu trắng, T0n/c: 132-134oC.
1H-NMR (DMSO-d6): δ (ppm) 6,35 và 6,16 (2H, 2 × d, J = 1,8 Hz, H-5 và H-7), 4,64 (2H, s, H-2), 3,85 (3H, s, OCH3), 3,82 (3H, s, OCH3).
13C-NMR (DMSO-d6): δ (ppm) 193,9 (C=O), 176,2 , 169,1 , 158,2 (C-8, C-6, C-4), 104,0 (C-9), 92,8 , 89,3 (C-5, C- 7), 75,2 (C-2), 55,8 và 56,2 (2 × OCH3). 3.1.2. Tổng hợp các hydroxyaurone (Z)-2-[(3,4-dihydroxyphenyl)methylene]- 4,6-dihydroxybenzofuran-3(2H)-one (56) và (Z)-2-[(4- hydroxyphenyl)methylene]-4,6-dihydroxybenzofuran-3(2H)-one (76)
Các hydroxyaurone đã được nghiên cứu tổng hợp bằng phản ứng ngưng tụ trực tiếp giữa các hydroxybenzofuranone với các hydroxybenzaldehyde sử dụng xúc tác HCl/MeOH ở nhiệt độ phịng .
Tổng hợp (Z)-2-[(3,4-dihydroxyphenyl)methylene]-4,6- dihydroxybenzofuran-3(2H)-one (56)
Trong bình cầu 3 cổ 50 mL đã nạp đầy khí nitơ cho hỗn hợp 4,6-
dihydroxybenzofuran-3(2H)-one (5b, 1,0 mmol) và 3,4-dihydroxybenzaldehyde (1,0 mmol) trong methanol (14 mL), HCl 36,0% (2,4 eq) được thêm vào ở nhiệt độ phịng. Hỗn hợp phản ứng được khuấy ở nhiệt độ phịng trong 24 h cho đến khi
phản ứng kết thúc (kiểm tra bằng SKLM). Sau đĩ cất loại bỏ methanol, phần cịn lại
được chiết với EtOAc (3 × 10 mL). Dịch chiết được rửa sạch bằng 10% dung dịch
NaCl và làm khan bằng Na2SO4. Cất loại dung mơi dưới áp suất giảm, thu được sản phẩm thơ. Tinh chế sản phẩm bằng cách chạy qua cột trên silica gel, hệ dung mơi rửa giải n-hexane / EtOAc (1/1) thu được chất 56 với hiệu suất 52%.
Hợp chất 56 là một chất rắn màu vàng. T0n/c: 282-283°C
FT-IR: νKBr (cm-1): 3469, 3357, 3120, 3039, 2896, 2852, 1654, 1562, 1527, 1449, 1340, 1293, 1245, 1155, 1063, 846, 805, 675, 548, 505, 460.
1H NMR (500 MHz, DMSO-d6): δ (ppm) 10,81, 9,53, 9,19 (4H, 3 × brs, 4 × OH); 7,38 (1H, d, J = 2,0 Hz, H-2′), 7,17 (1H, dd, J = 2,0, 8,5 Hz, H-6′), 6,81 (1H, d, J = 8,5 Hz, H-5′), 6,44 (1H, s, H-10), 6,17 (1H, d, J = 1,5 Hz, H-7), 6,06 (1H, d, J = 1,5 Hz, H-5). 13C NMR (125 MHz, DMSO-d6): δ (ppm) 179,0 (C=O), 167,5 (C-8), 166,9 (C-6), 158,1 (C-4), 147,4 (C-4’), 145,9 (C-2), 145,4 (C-3’), 123,9 (C-6’), 123,6 (C-1’), 117,6 (C-2’), 115,9 (C-5’), 109,6 (C-10), 102,9 (C-9), 97,6 (C-5), 90,3(C-7). Tổng hợp (Z)-2-[(4-hydroxyphenyl)methylene]-4,6-dihydroxybenzofuran- 3(2H)-one (76)
Tiến hành tương tự phản ứng ngưng tụ trực tiếp giữa (5b, 1,0 mmol) với 4- dihydroxybenzaldehyde (1,0 mmol) thu được chất 76 với hiệu suất 65 %.
Chất 76 là một chất rắn màu vàng. T0n/c: 292-294°C FT-IR: νKBr (cm-1): 3349, 2922, 1682, 1610, 1462, 1358, 1251, 1154, 1071, 819, 704, 618, 565. ESI-MS (negative): m/z = 269 [M-H]-. 1H NMR (500 MHz, DMSO-d6): δ (ppm) 7,74 (2H, d, J = 8,7 Hz, H-2′, H-6′), 6,85 (2H, d, J = 8,7 Hz, H-3′, H-5′), 6,54 (1H, s, H-10), 6,20 (1H, d, J = 1,2 Hz, H-5), 6,06 (1H, d, J = 1,2 Hz, H-7). 13C -NMR (125 MHz, DMSO-d6): δ (ppm) 179,2 (C=O), 167,6 , 167,2 , 158,8 , 158,3 (C-8, C-6, C-4, C-4’), 146,1 (C-2), 132,8 ( C-2’, C-6’), 123,4 (C-1’), 116,0 (C-3’, C-5’), 109,2 (C-10), 102,9 , 97,7 , 90,5 (C-5, 7, 9).
3.1.3. Tổng hợp các methoxyaurone (Z)-2-[(3,4-dimethoxyphenyl)methylene]- 4,6-dimethoxy-benzofuran-3(2H)-one (55) và (Z)-2-[(4-
methoxyphenyl)methylene]-4,6-dimethoxybenzofuran-3(2H)-one (77)
Các methoxyaurone cĩ các nhĩm thế hydroxyl đã được methyl hĩa (chất 55, chất 77) được ngưng tụ từ các methoxybenzofuranoen với các
methoxybenzaldehyde cĩ thể được tiến hành theo 2 phương pháp sử dụng xúc tác acid hoặc xúc tác base.
Phương pháp 1: Ngưng tụ trong mơi trường kiềm
Trong bình cầu 3 cổ 50 mL, hỗn hợp dung dịch của 4,6- dimethoxybenzofuran-3(2H)-one (18, 10 mmol) và 3,4-dimethoxybenzandehyde (10 mmol) trong MeOH (10 mL), được cho thêm dung dịch của KOH/MeOH (7,5 mg/15 mL). Hỗn hợp phản ứng được khuấy ở 60oC trong 30 phút, sau đĩ giảm xuống nhiệt độ phịng và trung hịa bằng HCl 10% cho đến pH = 3. Kết tủa màu
vàng hình thành được lọc, rửa bằng hỗn hợp MeOH / H2O (1/1) và kết tinh trong MeOH / H2O (10/1) thu được tinh thể hình kim màu vàng 55 (89%).
Phương pháp 2: ngưng tụ trong mơi trường acid
Trong bình cầu 3 cổ 50 mL đã nạp đầy khí nitơ cho 4,6-
dimethoxybenzofuran-3(2H)-one 18 (10 mmol) trong methanol (140 mL), 3,4-
dimetoxylbenzandehyde (10 mmol) và HCl (24 mmol). Hỗn hợp phản ứng được
khuấy ở nhiệt độ phịng 24 h cho đến khi phản ứng kết thúc (kiểm tra bằng SKLM). Sau đĩ cất loại bỏ methanol, phần cịn lại đã được chiết với EtOAc (3 × 10 mL).
Dịch chiết được rửa sạch bằng 10% dung dịch NaCl và làm khan bằng Na2SO4. Cất