2.1.1. Phương pháp phân lập các hợp chất
Sắc ký lớp mỏng (TLC)
Sắc ký lớp mỏng được thực hiện với bản mỏng tráng sẵn DC-Alufolien 60 F254(Merck 1,05715), RP18F254s (Merck). Phát hiện vệt chất bằng đèn tử ngoại ở hai bước sĩng 254 nm và 365 nm hoặc dùng thuốc thử là dung dịch ceri sulfat trong acid H2SO4, sấy khơ rồi hơ nĩng từ từ trên bếp điện đến khi hiện màu.
Sắc ký lớp mỏng điều chế
Sắc ký lớp mỏng điều chế thực hiện trên bản mỏng tráng sẵn silica gel 60G
F254 (Merck 1,05875), phát hiện vệt chất bằng đè tử ngoại ở hai bước sĩng 254 nm và 365 nm, hoặc cắt rìa bản mỏng để phun thuốc thử là dung dịch H2SO4 10%, hơ nĩng để phát hiện vệt chất; ghép lại bản mỏng như cũ để xác định vùng chất; sau đĩ cạo lớp Silica gel cĩ chất, giải hấp phụ và tinh chế lại bằng cách kết tinh trong dung mơi thích hợp.
Sắc ký cột (CC)
Sắc ký cột được tiến hành với chất hấp phụ là Silica gel pha thường và pha đảo. Silica gel pha thường cĩ cỡ hạt 0,040-0,063 mm (240-430 mesh). Silica gel
pha đảo YMC RP-18 (30- 50 µm, FuJisilisa Chemical Ltd.). Nhựa trao đổi ion
Diaion HP-20 ((Misubishi Chem. Ind. Co., Ltd.). Sắc lý lỏng cao áp (HPLC)
Sắc ký lỏng cao áp Agilent technologies 1200 Series của Viện Hĩa sinh biển, Viện Hàn lâm Khoa học và Cơng nghệ Việt Nam.
2.1.2. Phương pháp tổng hợp và tinh chế sản phẩm
- Các phản ứng được thực hiện bằng các phương pháp tổng hợp hữu cơ cơ
pháp glucosyl hĩa ... Ngồi ra cịn sử dụng một số phương pháp tổng hợp hữu cơ
đặc thù như: phản ứng Houben - Hoesch, phản ứng ngưng tụ Claisen - Schmidt...
- Phương pháp sắc ký lớp mỏng được sử dụng để giám sát tiến trình xảy ra
của các phản ứng hĩa học và phân tích chất lượng sản phẩm của phản ứng.
- Các hợp chất sau phản ứng được phân lập và tinh chế bằng các phương
pháp chiết, phương pháp sắc ký cột, phương pháp kết tinh,...
- Tất cả các hĩa chất dùng trong quá trình tổng hợp được mua từ các hãng: Sigma Aldrich, Merck và sử dụng mà khơng cần tinh chế lại.
- Các dung mơi sử dụng được cất lại hoặc làm khan theo điều kiện phản ứng.
2.1.3. Phương pháp xác định cấu trúc hĩa học
Phương pháp chung để xác định cấu trúc hố học của các hợp chất là sự kết hợp xác định giữa các thơng số vật lý với các phương pháp phổ hiện đại bao gồm:
Phổ hồng ngoại (FT-IR) được đo bằng máy NICOLET IMPACT-410
FTIR của hãng Carl Zeiss Jena (Đức) tại Viện Hĩa học – Viện Khoa học và Cơng nghệ Việt Nam.
Phổ khối lượng (ESI-MS) được ghi trên máy Agilent 6310 ion trap tại
Viện Hĩa học các hợp chất thiên nhiên – Viện Hàn lâm Khoa học và Cơng nghệ Việt Nam.
Phổ cộng hưởng từ hạt nhân (NMR) 1 chiều và 2 chiều sử dụng chất
nội chuẩn là TMS (δ = 0ppm), dung mơi CDCl3hoặc DMSO-d6được
ghi trên máy Bruker AM500 FT-NMR của Viện Hố học, Viện Hàn lâm Khoa học và Cơng nghệ Việt Nam ở tần số 500,13 MHz cho phổ
1H-NMR và ở tần số 125,76 MHz cho phổ 13C-NMR. Cấu trúc của các
hợp chất được xác định bằng sự kết hợp các phương pháp phổ và so
2.1.4. Khảo sát hoạt tính độc tế bào của các chất tổng hợp được. Vật liệu nghiên cứu Vật liệu nghiên cứu
Hố chất: Các aurone tổng hợp: Chất 55, chất 56, chất 76, chất 77, chất 78, chất 80,
chất 81
Các hĩa chất cần thiết khác của các hãng Sigma, GIBCO, Invitrogen v.v.
Các dịng tế bào ung thư: do GS. TS. J. M. Pezzuto, Trường Đại học Hawaii và
GS. Jeanette Maier, trường Đại học Milan, Italia cung cấp..
Phương pháp nghiên cứu
Phương pháp nuơi cấy tế bào in vitro
Các dịng tế bào ung thư được nuơi cấy dưới dạng đơn lớp trong mơi trường nuơi cấy DMEM với thành phần kèm theo gồm 2 mM L-glutamine, 10 mM HEPES, và 1,0 mM sodium pyruvate, ngồi ra bổ sung 10% fetal bovine serum – FBS (GIBCO).
Tế bào được cấy chuyển sau 3-5 ngày với tỉ lệ (1:3) và nuơi trong tủ ấm CO2 ở