Kết quả điện di trên gel agarose 1%, a- sản phẩm PCR nhân dịng gen mã hóa Pwo DNA polymerase sử dụng cặp mồi chứa vị trí cắt enzyme giới hạn, marker 1kb của hãng iNtRon (đường chạy 1) được sử dụng để so sánh kích thước của gen Pwo khuếch đại (đường chạy 2); b- Sản phẩm cắt đồng thời plasmid pEtM (đường chạy 1;2) và gen mã hóa Pwo DNA pol (đường chạy 4;5) bằng hai enzyme cắt giới hạn EcoRI và BamHI so sánh với marker 1 kb của hãng iNtRon (đường chạy 3).
Kết quả điện di sản phẩm PCR (hình 10a) cho thấy đã nhân dịng chính xác được đoạn gen mã hóa Pwo DNA polymerase. Sản phẩm nhân gen thể hiện một băng sáng rõ có kích thước khoảng 2344 bp theo lý thuyết. Tuy nhiên, kết quả PCR cũng cho thấy một số băng phụ phía trên băng chính (khoảng 4-5 kb). Vì vậy, sản phẩm PCR đã được thôi gel trước khi sử dụng cho phản ứng cắt enzyme giới hạn.
Tiếp tục đánh giá kết quả kiểm tra cắt gen và plasmid với cả 2 enzyme cắt giới hạn EcoRI và BamHI được điện di trên gel agarose 1% (hình 10b). Plasmid pEtM trước khi cắt bao gồm các băng chính sáng rõ tương ứng với các dạng của plasmid (xoắn, vòng và siêu xoắn). Plasmid sau khi cắt với enzyme giới hạn thu được 1 băng sáng với kích thước khoảng 6 kb tương ứng với kích thước được mở vịng. Do đó, enzyme đã cắt chính xác tại các vị trí cắt giới hạn mong muốn trên vector biểu hiện. Tuy nhiên plasmid có thể chưa được cắt hoàn toàn do vẫn quan sát thấy một băng mờ ở phía dưới băng plasmid cắt (đường chạy 1). Mặt khác, đoạn gen trước và sau khi cắt đã thu được kích thước bằng nhau từ kết quả điện di này. Điều này chứng tỏ đoạn gen đã được cắt đúng vị trí cắt giới hạn ở 2 đầu, cũng như
đoạn gen không chứa vị trí cắt bên trong. Vì vậy có thể tiến hành phản ứng nối bình thường cho gen và plasmid, tạo plasmid tái tổ hợp pEtM-Pwo.
3.2.2. Biến nạp vector tái tổ hợp pEtM-Pwo vào vi khuẩn E. coli BL21 (DE3)
a- 1kb Mk 1Kb Clone 1 Clone 2 Clone 3 2599 bp 266 bp 1 2 3 4 2kb 250bp 3kb b-