CHƯƠNG 2 NGUYÊN VẬT LIỆU VÀ PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU
2.1. NGUYÊN VẬT LIỆU
2.1.1. Đối tượng nghiên cứu
- Astaxanthin (90%) được tách chiết từ vi tảo lục Haematococcus pluvialis do phòng Công nghệ tảo, Viện Công nghệ sinh học, Viện Hàn lâm Khoa học và Công nghệ Việt Nam cung cấp.
2.1.2. Các dòng tế bào
- Tế bào ung thư đại tràng HT29 có nguồn gốc từ Bộ môn Sinh học tế bào, Trường Đại học Khoa học Tự nhiên, Đại học Quốc gia Hà Nội.
- Dòng tế bào gan ung thư HepG2 nguồn gốc từ phòng Thử nghiệm sinh học, Viện Công nghệ sinh học, Viện Hàn lâm Khoa học và Công nghệ Việt Nam.
2.1.3 Hóa chất
- Các hóa chất sử dụng chế tạo nano astaxanthin: Dung môi Dichloromethane; Tween 80 (Polysorbate 80; Sigma-Aldrich), cremophor RH40 (Sigma-Aldrich), copolyme polylactid-polyetylen glycol (PLA-PEG) đã được tổng hợp từ nghiên cứu trước đây [73] có khối lượng phân tử Mw là 8400, với chỉ số PDI là 1,2.
- Các hóa chất dùng để nuôi cấy tế bào: môi trường nuôi cấy Dulbecco's Modified Eagle Medium (DMEM), DMEM/high glucose, Fetal bovine serum (FBS), bovine serum albumin, penicillin, và streptomycin (Invitrogen, Mỹ), Fenofibrate (C20H21ClO4, Sigma F6020), Oil Red O (C26H24N4O, Sigma O0625), acid oleic (OA), isopropanol (Trung Quốc);
- Hóa chất dùng để xác định hoạt tính chống oxy hóa: DPPH (1,1- diphenyl-2-picrylhydrazyl), ethanol, methanol (Trung Quốc);
- Hóa chất dùng để tách chiết lipit: Phosphate buffered saline (PBS), n- hexane, isopropanol (Trung Quốc);
- Hóa chất dùng cho nhuộm lipit: Oil Red O (ORO - 1-([4- (Xylylazo)xyly]azo)phenylazo]-2-naphthol) (Sigma), formanlin (Trung Quốc).
2.1.4. Thiết bị
Thiết bị dùng cho nghiên cứu gồm:
- Kính hiển vi quang học Olympus CH02 và CX21 (Nhật Bản); - Kính hiển vi điện tử truyền qua JEM 1400 (Nhật Bản);
- Máy Litesizer™ 500 (Mỹ);
- Máy ảnh kỹ thuật số Canon IXY Digital 70 (Japan);
- Cân kỹ thuật Precisa XB 1200C (max 1200 g; e= 0,1 g; min 0,5 g; d= 0,01 g) (Switzerland);
- Cân phân tích Shimadzu AY 120 (max 120 g; d= 0,1 mg) (Nhật Bản); - Máy ly tâm Sorvall® LEGEND RT (Đức);
- Máy đo quang phổ UV1601 UV-Visble Spectrophotometer SHIMADZU (Nhật Bản);
- Máy khuấy từ Kika Labortechnik (Đức), - Tủ sấy Cornthem (New Zealand);
- Máy ly tâm Sorvall Legen RT 1900W (Kendro, Germany); - Buồng đếm Burker-Turk (Đức);
- Nồi khử trùng (ALP, Nhật Bản); - Tủ lạnh thường;
- Máy sắc kí khí HP-6890, ghép nối với Mass Selective Detector Agilent 5973;
- Máy sắc ký lỏng hiệu năng cao HPLC (Agilent 1260 – Mỹ) với bơm tứ cực G1311C, bộ bơm mẫu tự động G2260A, bộ điều nhiệt cột G1316A, đầu dò DAD G1315D. Cột XDB-C18 (150 mm × 4.6 mm, 5 µm)
- Cột HP-5MS; - Khí mang He;
- Pipetteman các loại (Gilson, France); - Pipette Pasteur (USA);