CHƯƠNG 3 KẾT QUẢ VÀ THẢO LUẬN
3.2. KẾT QUẢ ĐÁNH GIÁ MỘT SỐ HOẠT TÍNH SINH HỌC CỦA NANO
3.2.5. Tác dụng của nano-astaxanthin lên sự thay đổi hàm lượng lipit nội bào
lipit nội bào trong tế bào gan HepG2
Một trong những tác dụng sinh học quan trọng được biết đến rộng rãi của astaxanthin là tác dụng giảm lipit. Các nghiên cứu trên tế bào, động vật và người về astaxanthin đã được công bố. Jia và cộng sự [90] chỉ ra rằng astaxanthin ở nồng độ 10 µM có tác dụng giảm cholesterol và triglyceride nội bào tương ứng -14 và -20% trong tế bào HepG2. Hussein và cộng sự [91] đề xuất rằng việc sử dụng astaxanthin đã làm tăng mức cholesterol tốt (HDL-C) và giảm hàm lượng axit béo nonesterified và triglyceride trong mơ hình động vật của họ. Ngồi ra, chế độ ăn có bổ sung chiết xuất giàu astaxanthin từ tảo lục trong bốn tuần ở chuột bị đột biến gen apoE đã làm giảm đáng kể nồng độ triglyceride trong huyết tương [92]. Trong một nghiên cứu khác, cả nồng độ triglyceride trong gan và huyết tương và nồng độ cholesterol trong huyết tương đều giảm đáng kể ở nhóm bổ sung astaxanthin so với nhóm chứng [93]. Năm 2011, Yoshida và cộng sự [94] báo cáo kết quả thử nghiệm lâm sàng trên 61 người bị tăng lipit máu nhẹ cho thấy điều trị astaxanthin với liều 12 và 18 mg/day có tác dụng giảm nồng độ triglyceride trong huyết tương và astaxanthin với liều 6 và 12 mg/day có ý nghĩa tăng hàm lượng HDL-C. Trong nghiên cứu này, tác dụng giảm lipit của nanoastaxanthin đã được xác định. Kết quả phân tích hàm lượng cholesterol và triglyceride trong tế bào HepG2 được đo bằng phương pháp enzyme và đo trên máy phân tích tự động Olympus AU400; khả năng tích lũy lipit nội bào được phân tích bằng phương pháp nhuộm Oil Red O và đo mật độ quang ở bước sóng 500 nm trên máy quang phổ Hitachi U-1100 được thể hiện ở hình 3.10 và 3.11..
Hình 3.11. Tác dụng của nano astaxanthin lên hàm lượng cholesterol (A) và
triglycerid (B) trong tế bào HepG2. *, ** cho thấy sự khác biệt có ý nghĩa thống kê (*P < 0,05; ** P < 0,01) giữa các nhóm thí nghiệm với nhóm đối chứng
Kết quả trong Hình 3.11 cho thấy, tương tự như đối với chất chuẩn fenofibrate, nồng độ triglyceride và cholesterol nội bào trong các tế bào được ủ với nano astaxanthin giảm có ý nghĩa thống kê phụ thuộc vào nồng độ so với đối chứng. Nano astaxanthin có tác dụng giảm đáng kể nồng độ cholesterol từ 100% trong tế bào đối chứng xuống 78,3% (P<0,05) và 72,2% (P<0,01) trong tế bào được ủ với 50 và 100 µg/mL nano astaxanthin (Hình 3.11 A). Bên cạnh đó, hàm lượng triglyceride trong tế bào được ủ với nano astaxanthin với các nồng độ 10, 50 và 100 µg/mL cịn có tác dụng giảm nồng độ triglyceride tương ứng -12,5%, -17,1% và -20,5% so với đối chứng (Hình 3.11 B).
Tác dụng giảm hàm lượng lipit nội bào có thể so sánh tương đương giữa nano astaxanthin và chất chuẩn fenofibrate. Kết quả nhuộm ORO cũng cho kết quả tương tự như kết quả phân tích hàm lượng lipit nội bào (Hình 3.12). Tương tự như đối với các kết quả thu được trong mục 3.2.4, nano astaxanthin ở nồng độ từ 1 đến 8,3 nM đã cho các kết quả giảm lipit tương tự hoặc cao hơn so với tế bào được hấp thu astaxanthin ở nồng độ từ 10 đến 100 nM như trong công bố của Jia và cộng sự [22].
Hình 3.12. Khả năng tích lũy lipit nội bào được phân tích bằng phương pháp
nhuộm Oil Red O (A) và đo mật độ quang ở bước sóng 500 nm trên máy quang phổ Hitachi U-1100 (B). *, ** cho thấy sự khác biệt có ý nghĩa thống kê (*P < 0,05; ** P < 0,01) giữa các nhóm thí nghiệm với nhóm đối chứng.
Một số nghiên cứu cho thấy các hợp chất Cremophors thường liên quan đến phản ứng quá mẫn phản vệ nghiêm trọng, tăng lipit máu, các dạng
lipoprotein bất thường, kết tập hồng cầu và bệnh thần kinh ngoại vi [95]. Và để giảm các tác dụng phụ này, một số phương pháp đã được áp dụng, chẳng hạn như thay thế Cremophor bằng Solutol HS 15 [96] và thêm chất hoạt động bề mặt hoặc dung môi [97]. Trong nghiên cứu này mẫu trắng là nano khơng có chứa astaxanthin, ở các nồng độ khác nhau (10 µM, 50 µM, 100 µM) đều khơng có sự thay đổi về nồng độ triglyceride và cholesterol nội bào (Hình 3.11). Kết qủa đo OD khi các tế bào được nhuộm ORO cũng cho kết quả tương tự (Hình 3.12). Do đó, phương pháp tạo nano trong nghiên cứu này có tác dụng hạn chế các hiệu ứng phụ không mong muốn của hợp chất Cremophors.