Phần 4 Kết quả và thảo luận
4.1. Kết quả Khảo sát đặc tính sinh học của chủng giống để sản xuất vắc xin
4.1.2. Kết quả khảo sát đặc tính sinh học của giống virus IB-H120
4.1.2.1. Kết quả đánh giá độ ổn định giống virus IB-H120
Giống virus IB có khả năng nhân lên và phát triển tốt trên phôi gà. Việc đánh giá độ ổn định giống virus IB được thực hiện cấy chuyển 5 lần liên tiếp trên phôi gà 9-11 ngày tuổi. Sau 120 giờ gây nhiễm, trứng được giết lạnh. Tiến hành mổ trứng kiểm tra bệnh tích, xác định tỷ lệ chết, tỷ lệ nhiễm. Kết quả được thể hiện qua bảng 4.5.
Từ bảng 4.5 cho thấy qua 5 lần cấy chuyển tiếp đời, thời gian chết phôi trung bình, tỷ lệ phôi nhiễm, tỷ lệ chết phôi tương đối ổn định từ đời thứ 2 đến đời thứ 5.
Thời gian gây chết phôi trung bình dao động 40-86 giờ. ở lần tiêm truyền thứ nhất, chúng tôi không thấy có sự chết phôi. Ở lần tiêm thứ 2, thời gian chết phôi tập trung ở thời điểm 40-86 giờ, tỷ lệ chết phôi đạt 70%, 100% đều có biểu hiện bệnh tích điển hình trên phôi. Từ lần tiêm thứ 3 trở đi, thời gian chết phôi dao động từ 40-86 giờ, tỷ lệ chết phôi giảm từ 65% xuống còn 15% ở lần cấy chuyển thứ 5.
Quan sát bệnh tích trên phôi gà cho thấy: Ở tất cả 5 lần tiêm liên tiếp, những phôi thí nghiệm bị nhiễm virus đều có chung một đặc điểm bệnh tích là phôi Sung huyết, còi cọc, co quắp, chân ôm chặt lấy đầu, màng nhung niệu dày, bám chặt lấy phôi, nhiều phôi lắng đọng urat.
Lô đối chứng: Phôi không bị sung huyết, các bộ phận phôi phát triển bình thường.
Bảng 4.5. Kết quả theo dõi tình trạng phôi gà sau gây nhiễm virus IB-H120
Lần tiêm truyền 1 2 3 4 5
Qua 5 lần tiếp đời liên tiếp, thời gian chết phôi trung bình dao động từ 40 – 72 giờ. Qua đây có thể thấy rằng thời gian chết phôi và bệnh tích phôi nhìn chung tương đối ổn định từ đời thứ 2 đến đời thứ 5.
Bảng 4.6. Kết quả xác định hiệu giá giống IB- H120 ở đời 1Độ Liều Độ Liều pha gây loãng nhiễm virus (ml) 10-1 0,1 10-2 0,1 10-3 0,1 10-4 0,1 10-5 0,1 10-6 0,1 10-7 0,1 10-8 0,1 10-9 0,1 10-10 0,1 Ghi chú: - I: Số trứng có bệnh tích phôi ở mỗi nồng độ
- N: Số trứng không có bệnh tích phôi ở mỗi nồng độ
- i: số trứng có bệnh tích phôi (cộng dồn từ dưới lên)
- n: số trứng không có bệnh tích phôi (cộng dồn từ trên xuống)
Tử bảng 4.6 cho thấy độ pha loãng virus càng thấp, số phôi nhiễm càng giảm, số phôi không nhiễm càng tăng. Độ pha loãng virus từ 10-1 đến 10-3, toàn bộ phôi đều bị nhiễm. Ở độ pha loãng 10-4, tỷ lệ phôi nhiễm là 87,5%. Tiếp theo
ở độ pha loãng thấp hơn là 10-5 thì chỉ có 42,86% số phôi nhiễm và tỷ lệ phôi nhiễm từ độ pha loãng 10-6 đến 10-10, tỷ lệ phôi nhiễm giảm dần và không có phôi nhiễm từ nồng độ pha loãng 10-7. Kết quả xác định hiệu giá giống virus IB H120 ở đời thứ 1 theo công thức Reed – Muench là 105,84EID50/1ml.
Việc xác định hiệu giá ở các đời tiếp theo được thực hiện tương tự như đời
1. Kết quả tổng hợp hiệu giá giống virus IB qua 5 đời cấy chuyển được thể hiện ở bảng 4.7.
Bảng 4.7. Kết quả tổng hợp hiệu giá giống virus IB-H120 qua các tiếp đời
Qua bảng 4.7, cho thấy hiệu giá virus tương đối ổn định. Từ lần tiêm truyền thứ 2 trở đi hiệu giá virus ổn định từ 106,5 – 106,9 EID50/1ml.
4.1.2.2. Kết quả đánh giá độc lực giống virus IB-H120
Để xác định chỉ tiêu độc lực của virus IB H120, tiến hành xác định chỉ số EID50 trên phôi trứng gà 9 – 11 ngày tuổi. Thí nghiệm được lặp lại 3 lần. Kết quả xác định chỉ số độc lực EID50 của virus IB-H120 dựa vào quan sát bệnh tích phôi. Những phôi bị nhiễm IB (dương tính) là những phôi chậm phát triển, còi cọc, cơ thể uốn cong hình cầu, hai chân ép lên đầu cùng với chứng suy nhược các bắp cơ (gọi là phôi lùn) và lắng đọng urat trong thận, nước xoang niệu mô trong, một số phôi sớm có biểu hiện xuất huyết toàn thân. Kết quả được trình bày ở bảng 4.8.
Kết quả cho thấy độ pha loãng virus càng thấp, số phôi nhiễm càng giảm, số phôi không nhiễm càng tăng. Độ pha loãng virus từ 10-1 đến 10-4, toàn bộ phôi đều bị nhiễm. Ở độ pha loãng 10-5, tỷ lệ phôi nhiễm là 85,71%. Tiếp theo ở độ pha loãng thấp hơn là 10-6 thì chỉ có 33,33% số phôi nhiễm và tỷ lệ phôi nhiễm từ độ pha loãng 10-7 đến 10-10, không có phôi nhiễm. Kết quả xác định độc lực virus IB-H120 bằng chỉ số EID50 được tính toán theo công thức Reed – Muench có giá trị bằng 10-5,68/0,1 ml, có nghĩa là với nồng độ pha loãng virus 10-5,68 khi nhiễm vào trứng gà có phôi thì có khả năng gây nhiễm 50% số trứng thí nghiệm, do đó hiệu giá virus đạt được là 105,68EID50/0,1 ml (tức 106,68EID50/1 ml).
Bảng 4.8. Kết quả EID50 giống IB- H120 lần 1Độ Liều Độ Liều pha gây loãng nhiễm virus (ml) 10-1 0,1 10-2 0,1 10-3 0,1 10-4 0,1 10-5 0,1 10-6 0,1 10-7 0,1 10-8 0,1 10-9 0,1 10-10 0,1 Ghi chú: -I: Số trứng có bệnh tích phôi ở mỗi nồng độ -N: Số trứng không có bệnh tích phôi ở mỗi nồng độ
-i: số trứng có bệnh tích phôi (cộng dồn từ dưới lên) -n: số trứng không có bệnh tích phôi (cộng dồn từ trên xuống)
Thí nghiệm lần 2 cũng được tiến hành tương tự như lần 1, chỉ số EID50 ở lần 2 và lần 3 lần lượt có giá trị 106,84EID50/1ml và 106,9EID50/1ml. Trung bình qua 3 lần thí nghiệm, chỉ số độc lực của virus IB-H120 là 106,8EID50/1ml.
Sau khi chuẩn độ cho thấy giống virus IB-H120 thích nghi trên trứng gà có phôi đã có đặc tính gây nhiễm ở nồng độ phù hợp với lý lịch giống ban đầu.