Phần 4 Kết quả và thảo luận
4.3. Kết quả Nghiên cứu xây dựng quy trình sản xuất vắc xin vô hoạt ND-IB
XIN VÔ HOẠT ND-IB
4.3.1. Kết quả phối trộn 9 nghiệm thức vắc xin vô hoạt
Sau khi xác định được hiệu giá virus tối ưu cơ số 10 ngưỡng trên và ngưỡng dưới, việc xác định hàm lượng kháng nguyên có trong 1 liều vắc xin đơn theo cơ số 2 với 3 thang liều tương ứng từng loại kháng nguyên được thực hiện. Với kháng nguyên LaSota, sử dụng 3 thang liều 4x107 - 8x107 - 16x107 EID50/liều; Với kháng nguyên IBV sử dụng 3 thang liều 4x105 - 8x105 - 16x105 EID50/liều
Vắc xin sau khi phối trộn được kiểm tra các chỉ tiêu độ nhớt, kích thước, độ ổn định và chỉ tiêu vô trùng để đánh giá chất lượng nhũ dầu. Kết quả trình bày ở bảng 4.23.
Bảng 4.23. Kết quả kiểm tra 9 nghiệm thức sau phối trộn 2 loại kháng nguyên với chất bổ trợ dầu
Chỉ tiêu kiểm tra
Cảm quan
Độ nhớt
Kết quả bảng 4.23 cho thấy 9 nghiệm thức vắc xin nhị giá phối trộn với chất bổ trợ dầu đều có màu trắng sữa, đồng nhất, không phân lớp, không đông vón, không lắng cặn, không có dị vật, không bị phân lớp, đều đạt chỉ tiêu vô trùng.
Độ nhớt vắc xin đạt giá trị trung bình 40,3 mPa.s, nằm trong giới hạn cho phép đối với vắc xin nhũ dầu 30-45 mPa.s.
4.3.2. Kết quả đánh giá 9 nghiệm thức vắc xin trên động vật thí nghiệm
Tại mỗi nghiệm thức, thử nghiệm trên gà mẫn cảm. Sau thời gian theo dõi, đánh giá độ an toàn và hiệu giá kháng thể kháng virus Newcastle bằng phản ứng HI, kháng thể kháng virus IB bằng phản ứng ELISA. Kết quả được trình bày bảng 4.24.
Bảng 4.24. Kết quả đánh giá 9 nghiệm thức trên động vật thí nghiệm
ND-HI (HI trung bình) (% Titer ≥ 4 log2)
Số nghiệm thức
IB-Elisa (% dương tính)
Số nghiệm thức
Theo số liệu bảng 4.24 cho thấy, với mỗi một loại kháng thể, tỷ lệ nghiệm thức cho kết quả phân đều ở 3 nhóm, nhóm cho kết quả <50%; nhóm cho kết quả từ 50% -79%, và nhóm cho kết quả ≥80% dương tính với các phương pháp xét nghiệm huyết thanh học. Có 2 nghiệm thức chung cho kết quả ≥80% mẫu huyết thanh dương tính với kháng thể kháng virus ND và kháng thể kháng virus IB.
Theo dữ liệu, lựa chọn được nghiệm thức tối ưu nhất thỏa mãn cho hiệu giá huyết thanh cao với cả 2 bệnh Newcastle và bệnh Viêm khí quản truyền nhiễm bao gồm nồng độ kháng nguyên virus Newcastle chủng LaSota là 16.107 EID50/liều và 8.105 EID50/liều đối với virus IB-H120
4.3.3. Kết quả nghiên cứu Quy trình sản xuất vắc xin vô hoạt ND-IB với chấtbổ trợ dầu bổ trợ dầu
Để có vắc xin chất lượng, yêu cầu nguyên liệu sử dụng trong sản xuất phải được lựa chọn đáp ứng đúng tiêu chuẩn, thao tác kỹ thuật dứt khoát, tránh tạp nhiễm trong quá trình thực hiện.
Quy trình sản xuất vắc xin vô hoạt ND-IB với chất bổ trợ dầu được biểu diễn ở hình 4.1. Giai đoạn 1 Giai đoạn 2
Chuẩn bị kháng nguyên virus Newcastle:
(1)Vệ sinh trứng và ấp trứng 37,50C, độ ẩm 65%
(2)Gây nhiễm virus Newcastle vào trứng gà có phôi
(3)Ấp tiếp ở 370C, độ ẩm 65% (4)Thu hoạch dịch niệu nang (5)Kiểm tra dịch niệu
Bất hoạt virus Newcastle
(6)Bất hoạt bằng formalin (7) Kiểm tra sau bất hoạt
Chuẩn bị kháng nguyên virus IB:
(1)Vệ sinh trứng và ấp trứng 37,50C, độ ẩm 65%
(2)Gây nhiễm virus IB vào trứng gà có phôi
(3)Ấp tiếp ở 370C, độ ẩm 65% (4)Thu hoạch dịch niệu nang (5)Kiểm tra dịch niệu
Bất hoạt virus IB
(6)Bất hoạt bằng formalin (7) Kiểm tra sau bất hoạt
Giai đoạn 3 Giai đoạn 4 Phối trộn BTP (8) Phối trộn, gây nhũ (9)Chia liều vắc xin ra các lọ
Hoàn thiện sản phẩm
(10) Dán nhãn, đóng gói và nhập kho
Hình 4.1. Sơ đồ quy trình sản xuất vắc xin vô hoạt ND- IB Ở từng giai đoạn có các bước kiểm tra tương ứng.
Giai đoạn 1: Kiểm tra tỷ lệ trứng có phôi, sức sống cúa phôi, kiểm tra vô trùng và hiệu giá virus.
Giai đoạn 2: kiểm tra virus sau bất hoạt
Giai đoạn 3: Kiểm tra vắc xin sau phối trộn, chia liều: vô trùng, an toàn, hiệu lực
4.3.3.2. Kết quả sản xuất vắc xin vô hoạt ND-IB quy mô phòng thí nghiệm
Trong sản xuất vắc xin vô hoạt, việc lựa chọn chất bổ trợ phù hợp đem lại hiệu quả sử dụng trên động vật mang ý nghĩa quan trọng. Chúng tôi sử dụng chất bổ trợ nhũ dầu Montanide ISA 71RVG do công ty Seppic cung cấp, tỷ lệ 60:40, quy mô sản xuất từ 2000-3000 liều.
Kết quả được trình bày qua bảng 4.25.
Bảng 4.25. Kết quả sản xuất vắc xin vô hoạt ND-IB quy mô phòng thí nghiệm
Lô VX
1 2 3