Hình 4.5. Kết quả RT-PCR kiểm tra 4 chủng virus LMLM phân lập được với mồi định type A LMLM
Hình 4.6. Kết quả RT-PCR kiểm tra 4 chủng virus LMLM phân lập được với mồi định type Asia1 LMLM
Trong đó:
M: Marker 3: O/VN/HD/2016 N: Đối chứng âm
1: O/VN/BN/2016 4: O/VN/BG2/2016
2: O/VN/BG1/2016 P: Đối chứng dương
4.2.3. Kết quả xác định hiệu giá của virus LMLM type O 4.2.3.1. Đặc điểm sinh trưởng, phát triển của virus trên tế bào 4.2.3.1. Đặc điểm sinh trưởng, phát triển của virus trên tế bào
Để xác định đường cong sinh trưởng của virus chúng tôi tiến hành gây nhiễm virus và theo dõi sự nhân lên của virus theo thời gian. Đối với mỗi mẫu virus chúng tôi chuẩn bị 5 chai tế bào BHK21 nuôi trên môi trường DMEM như nhau. Khi tế bào bám đáy được 80%, chúng tôi tiến hành gây nhiễm 500µl dịch virus LMLM vào 4 chai và 500µl môi trường DMEM vào chai đối chứng âm. Sau đó nuôi cả 5 chai cùng điều kiện 370C và 5% CO2. Sau khi gây nhiễm virus trên tế bào, chúng tôi tiến hành thu virus ở các thời điểm 12h, 24h, 36h, 48h, 60h và 72h. Sau 72h, tất cả các chai gây nhiễm được tiến hành đông tan, thu virus. Hàm lượng virus ở mỗi thời điểm được xác định bằng phương pháp chuẩn độ TCID50. Kết quả chuẩn độ của 4 chủng virus được thể hiện trong bảng 4.4 và hình 4.7.
Bảng 4.4. Kết quả chuẩn độ virus LMLM type O (10x TCID50/ml)
12h 24h 36h 48h 60h 72h
O/VN/BG1/2016 4,25 6 7 7,25 7,13 7,13
O/VN/BN/2016 4,38 5,88 7,13 7,38 7,25 7
O/VN/HD/2016 4,5 5,38 6,88 7,13 7 7