Kết quả mổ khám kiểm tra biến đổi đại thể ở phổi cho thấy:
(1) Về màu sắc: toàn bộ các thùy phổi, mặt lƣng và mặt bụng của phổi đều có màu hồng nhạt. Riêng phổi của lợn R2.1 chúng tôi thấy mặt lƣng của thùy tim và một phần nhỏ của thùy hoành có màu xám.
(2) Về đàn tính: khi cạo nhẹ sống dao lên bề mặt phổi thấy phổi bị xẹp và bề mặt phổi mất trạng thái láng bóng. Dùng tay cảm giác các thùy phổi không phát hiện thấy hiện tƣợng sƣng cứng. Cắt những miếng phổi nhỏ nhƣ hạt đậu
xám (R2.1) chúng tôi cũng có nhận xét tƣơng tự.
(3) Về mặt cắt của phổi: dùng dao cắt ngang lá phổi quan sát đƣợc màu của mặt cắt đồng nhất, có màu hồng nhạt.
(4) Về đƣờng dẫn khí: toàn bộ niêm mạc thanh quản, khí quản, nhánh phế quản lớn đều có màu trắng, không quan sát đƣợc dịch rỉ viêm. Dùng tay ép nhẹ vào tổ chức phổi, chỉ thấy bọt khí thoát ra ở những nhánh phế quản.
Nhƣ vậy, về mặt đại thể, toàn bộ phổi của lợn đƣợc tiêm vacxin PCV2 thử nghiệm (CircoVNUA), vacxin thƣơng mại (CircoFLEX) và lợn đối chứng đều bình thƣờng, không phát hiện thấy hiện tƣợng viêm hạch lympho và hiện tƣợng viêm phổi. Tổng hợp biến đổi bệnh lý đại thể ở lợn tiêm vacxin PCV2 thử nghiệm đƣợc trình bày ở bảng 4.9.
Bảng 4.9. Tổng hợp biến đổi bệnh lý đại thể ở lợn tiêm vacxin PCV2
TT Cơ quan Có biến đổi
1 Hạch bẹn nông - 2 Hạch dƣới hàm - 3 Hạch amidal - 4 Hạch cuống phổi - 5 Hạch màng treo ruột - 6 Hạch gan- dạ dày - 7 Thanh quản - 8 Khí quản - 9 Phế quản lớn - 10 Phổi - 11 Tim - 12 Gan - 13 Lách - 14 Thận - 15 Dạ dày - 16 Ruột non - 17 Manh tràng - 18 Kết tràng - 19 Trực tràng - 20 Bàng quang - 21 Não - 22 Cơ -
Ở các lợn mổ khám, chúng tôi tiếp tục nghiên cứu biến đổi bệnh tích vi thể của hạch lympho. Kết quả đƣợc trình bày ở hình 4.7.
Hình 4.7. Biến đổi bệnh lý vi thể ở hạch lympho (100X)
Quan sát tiêu bản bệnh lý vi thể của hạch lympho, chúng tôi không quan sát đƣợc hiện tƣợng thoái hóa hạch lympho. Đặc biệt, trong toàn bộ các tiêu bản quan sát, chúng tôi không phát hiện thấy tế bào khổng lồ (biến đổi bệnh lý vi thể đặc trƣng ở hạch do PCV2 gây ra).
Nhƣ vậy, kết quả nghiên cứu bệnh lý đại thể và vi thể cho thấy vacxin thử nghiệm CircoVNUA là an toàn, không gây biến đổi bệnh lý đại thể và vi thể đặc trƣng của bệnh do PCV2 gây ra.
4.2.2. Kết quả nghiên cứu so sánh hàm lƣợng kháng thể ở lợn đƣợc tiêm vacxin vô hoạt PCV2 thử nghiệm và vacxin thƣơng mại vacxin vô hoạt PCV2 thử nghiệm và vacxin thƣơng mại
Kết quả hàm lƣợng kháng thể của lợn đƣợc tiêm vacxin PCV2 đƣợc xác định bằng phản ứng ELISA
Hình 4.8 trình bày kết quả so sánh đáp ứng miễn dịch của lợn tiêm vacxin thử nghiệm (CircoVNUA) và vacxin thƣơng mại (CircoFLEX).
Hình 4.8. Đáp ứng miễn dịch của lợn đƣợc tiêm vacxin thử nghiệm và vacxin thƣơng mại
Kết quả trình bày ở hình 4.8(A) cho thấy, lợn đƣợc tiêm vacxin thử nghiệm và vacxin thƣơng mại đều sản sinh đáp ứng miễn dịch dịch thể đặc hiệu. Hiện tƣợng chuyển dƣơng tính huyết thanh học sau mũi tiêm thứ 1 xảy ra trong vòng D14- D28. Ở cả hai loại vacxin, dƣơng tính huyết thanh học kéo dài ít nhất đến ngày D70 sau tiêm vacxin. So sánh mức độ khác biệt về đáp ứng miễn dịch (hình 4.8 B), chúng tôi thấy vacxin CircoFLEX có mức chuyển dƣơng tính huyết thanh học ở thời điểm sau vacxin (t2) so với thời điểm bắt đầu vacxin (t1) đều lớn hơn so với lợn đƣợc tiêm vacxin thử nghiệm.
Nhƣ vậy, về đáp ứng miễn dịch dịch thể, chúng tôi thấy vacxin thử nghiệm CircoVNUA kích thích lợn sản sinh đáp ứng miễn dịch với độ dài tƣơng tự nhƣ vacxin thƣơng mại CircoFLEX, nhƣng có mức kích thích sản sinh đáp ứng miễn dịch thấp hơn.
PHẦN 5. KẾT LUẬN VÀ KIẾN NGHỊ 5.1. KẾT LUẬN 5.1. KẾT LUẬN
Về chế vacxin vô hoạt PCV2 thử nghiệm
- 03 chủng virus dùng sản xuất vacxin vô hoạt PCV2 thử nghiệm đều đạt thuần khiết.
- Thành công trong việc tinh khiết và cô đặc virus để chế vacxin và dùng BEI 0,2 % để bất hoàn hoàn toàn virus.
- Vacxin thử nghiệm CircoVNUA đạt thuần khiết, vô trùng theo TCVN 8684-2011.
Về đánh giá vacxin vô hoạt PCV2 thử nghiệm
- Vacxin thử nghiệm Circo VNUA là an toàn:
Lợn đƣợc tiêm vacxin vô hoạt PCV2 thử nghiệm có sự tăng trọng không có sự sai khác so với lợn đƣợc tiêm vacxin thƣơng mại và lợn đối chứng.
Lợn đƣợc tiêm không có bất kì dấu hiệu, triệu chứng, bệnh tích đại thể và vi thể đặc trƣng của bệnh do PCV2 gây ra.
- Vacxin thử nghiệm CircoVNUA kích thích lợn sản sinh đáp ứng miễn dịch với độ dài tƣơng tự nhƣ vacxin thƣơng mại CircoFLEX, nhƣng có mức kích thích sản sinh đáp ứng miễn dịch thấp hơn.
5.2. KIẾN NGHỊ
- Tiếp tục đề tài nghiên cứu để xác định thêm một số chỉ tiêu về hiệu lực của vacxin thử nghiệm.
- Đề xuất đề tài nghiên cứu sản xuất vacxin PCV2 thƣơng mại từ các chủng lƣu hành tại Việt Nam
TÀI LIỆU THAM KHẢO
Tiếng Việt:
1. Huỳnh Thị Mỹ Lệ, Mai Thị Ngân and Nguyễn Văn Giáp, 2012a: Xác định tỷ lệ lƣu hành kháng thể huyết thanh kháng Porcine circovirus type 2 (PCV2) ở đàn lợn nuôi tại một số tỉnh miền Bắc. Khoa học Kỹ thuật Thú y, 7.
2. Huỳnh Thị Mỹ Lệ and Nguyễn Văn Giáp, 2013: Phân lập và xác định đặc tính sinh học của Porcine circovirus type 2 (PCV2) ở đàn lợn nuôi tại một số tỉnh miền Bắc Việt Nam. Tạp chí Khoa học và Phát triển, 11, 304-309.
3. Huỳnh Thị Mỹ Lệ, Nguyễn Văn Giáp, Đặng Hữu Anh and Nguyễn Bá Tiếp, 2012b: Biểu hiện lâm sàng và bệnh tích hội chứng gày còm sau cai sữa liên quan đến Porcine circovirus type 2 ở đàn lợn nuôi tại một số tỉnh miền Bắc Việt Nam. Tạp chí Khoa học và Phát triển, 7, 968-977.
4. Nguyễn Thị Thu Hồng, Lê Thị Thu Phƣơng, Đặng Hùng, Nguyễn Tiến Hà, Nguyễn Ngọc Hải, Chris J. Morrissy and Darren Schfer, 2008: Phân tích di truyền circo virus lợn typ 2 (PCV2) trên lợn tại khu vực Nam Bộ. Khoa học Kỹ thuật Thú y, XV, 5 - 12.
5. Nguyễn Thị Thu Hồng, Phan Hoàng Dũng, Đặng Hùng, Nguyễn Tiến Hà and Chris Morrissy, 2006: Bƣớc đầu khảo sát về tình hình nhiễm PCV2 trên đàn heo nuôi ở một số tỉnh thành phía Nam. Khoa học Kỹ thuật Thú y, XIII, 67 - 69.
6. Trần Thị Dân, Nguyễn Tất Toàn, Nguyễn Thị Thu Năm, Võ Thị Trà An, Hồ Thị Nga, Nguyễn Thị Phƣớc Ninh, Lê Hữu Ngọc, Vũ Đình Hòa, Bùi Văn Đông and Nguyễn Hữu Tín, 2010: Biến đổi chỉ tiêu huyết học và bệnh tích ở heo nuôi thịt đƣợc tiêm chủng vacxin thể ORF2 phòng ngừa hội chứng gầy còm và viêm da-thận do circovirus typ 2. Khoa học Kỹ thuật Thú y, 17.
Tiếng Anh:
7. Nawagitgul, P., I. Morozov, S. R. Bolin, P. A. Harms, S. D. Sorden and P. S. Paul, 2000: Open reading frame 2 of porcine circovirus type 2 encodes a major capsid protein. J Gen Virol, 81, 2281-2287.
8. Cook, A. J., 2001: A case study: control study of post-weaning multi-systemic wasting syndrome (PMWS) and porcine dermatitis nepropathy syndrome (PDNS). The Pig Journal, 48, 53 - 60.
9. Chae, C., 2012a: Commercial porcine circovirus type 2 vaccines: efficacy and clinical application. Vet J, 194, 151-157.
10. Chae, J. S. and K. S. Choi, 2010: Genetic diversity of porcine circovirus type 2 from pigs in Republic of Korea. Res Vet Sci, 88, 333-338.
11. Chiarelli-Neto, O., K. Yotoko, P. Vidigal, F. Silva, L. Castro, J. Fietto, A. Silva and M. Almeida, 2009: Classification and putative origins of Brazilian porcine circovirus 2 inferred through phylogenetic and phylogeographical approaches. Virus Research, 140, 57-63.
12. Cortey, M., E. Pileri, M. Sibila, J. Pujols, M. Balasch, J. Plana and J. Segales, 2011: Genotypic shift of porcine circovirus type 2 from PCV-2a to PCV-2b in Spain from 1985 to 2008. Vet J, 187, 363-368.
13. Dewey, C. E., W. T. Johnston, L. Gould and T. L. Whiting, 2006: Postweaning mortality in Manitoba swine. Can J Vet Res, 70, 161-167.
14. Dupont, K., E. O. Nielsen, P. Baekbo and L. E. Larsen, 2008: Genomic analysis of PCV2 isolates from Danish archives and a current PMWS case-control study supports a shift in genotypes with time. Vet Microbiol, 128, 56-64.
15. Fenaux, M., P. G. Halbur, G. Haqshenas, R. Royer, P. Thomas, P. Nawagitgul, M. Gill, T. E. Toth and X. J. Meng, 2002: Cloned genomic DNA of type 2 porcine circovirus is infectious when injected directly into the liver and lymph nodes of pigs: characterization of clinical disease, virus distribution, and pathologic lesions. Journal of Virology, 76, 541-551.
16. Ferreira, D., B. Sansot and A. Laval, 2001: Attempt to use serotherapy to control mortality in PMWS. Proc. ssDNA viruses of plants, birds, pigs, primates. S, 144.
17. Gagnon, C. A., N. Music, G. Fontaine, D. Tremblay and J. Harel, 2010: Emergence of a new type of porcine circovirus in swine (PCV): a type 1 and type 2 PCV recombinant. Vet Microbiol, 144, 18-23.
18. Gagnon, C. A., D. Tremblay, P. Tijssen, M. H. Venne, A. Houde and S. M. Elahi, 2007: The emergence of porcine circovirus 2b genotype (PCV-2b) in swine in Canada. Can Vet J, 48, 811-819.
19. Gillespie, J., T. Opriessnig, X. J. Meng, K. Pelzer and V. Buechner-Maxwell, 2009: Porcine circovirus type 2 and porcine circovirus-associated disease. J Vet Intern Med, 23, 1151-1163.
20. Guo, L. J., Y. H. Lu, Y. W. Wei, L. P. Huang and C. M. Liu, 2010: Porcine circovirus type 2 (PCV2): genetic variation and newly emerging genotypes in China. Virol J, 7, 273.
21. Hamel, A. L., L. L. Lin and G. P. Nayar, 1998: Nucleotide sequence of porcine circovirus associated with postweaning multisystemic wasting syndrome in pigs. J Virol, 72, 5262-5267.
22. Huynh, T. M., B. H. Nguyen, V. G. Nguyen, H. A. Dang, T. N. Mai, T. H. Tran, M. H. Ngo, V. T. Le, T. N. Vu, T. K. Ta, V. H. Vo, H. K. Kim and B. K. Park, 2014: Phylogenetic and phylogeographic analyses of porcine circovirus type 2 among pig farms in Vietnam. Transbound Emerg Dis, 61, e25-34.
23. Jaganathan, S., O. Toung, P. Yee, T. Yew, C. Yoon and L. Keong, 2011: Genetic characterization of Porcine circovirus 2 found in Malaysia. Virology Journal, 8, 437. 24. Jantafong, T., A. Boonsoongnern, P. Poolperm, K. Urairong, C. Lekcharoensuk and P. Lekcharoensuk, 2011: Genetic characterization of porcine circovirus type 2 in piglets from PMWS-affected and -negative farms in Thailand. Virol J, 8, 88.
25. Kim, H. B., K. S. Lyoo and H. S. Joo, 2009: Efficacy of different disinfectants in vitro against porcine circovirus type 2. Vet Rec, 164, 599-600.
26. Kurtz, S., L. Grau-Roma, M. Cortey, M. Fort, F. Rodriguez, M. Sibila and J. Segales, 2014: Pigs naturally exposed to porcine circovirus type 2 (PCV2) generate antibody responses capable to neutralise PCV2 isolates of different genotypes and geographic origins. Vet Res, 45, 29.
27. Lam, T. H. and C. M. Duong, 2006: Detection of porcine circovirus from lesions of postweaning-pig with wasting disease at some farms in Ho Chi Minh city and some adjacent provinces. Proceedings of international workshop on Biotechnology in agriculture, pp. 65 - 67. Ho Chi Minh city, Vietnam.
28. Liu, J., I. Chen, Q. Du, H. Chua and J. Kwang, 2006b: The ORF3 protein of porcine circovirus type 2 is involved in viral pathogenesis in vivo. Journal of Virology, 80, 5065-5073.
29. Lopez-Soria, S., J. Segales, N. Rose, M. J. Vinas, P. Blanchard, F. Madec, A. Jestin, J. Casal and M. Domingo, 2005: An exploratory study on risk factors for postweaning multisystemic wasting syndrome (PMWS) in Spain. Prev Vet Med, 69, 97-107.
30. Lyoo, K., H. Joo, B. Caldwell, H. Kim, P. R. Davies and J. Torrison, 2011: Comparative efficacy of three commercial PCV2 vaccines in conventionally reared pigs. Vet J, 189, 58-62.
31. Martin, H., M. F. Le Potier and P. Maris, 2008: Virucidal efficacy of nine commercial disinfectants against porcine circovirus type 2. Vet J, 177, 388-393.
32. McKeown, N. E., T. Opriessnig, P. Thomas, D. K. Guenette, F. Elvinger, M. Fenaux, P. G. Halbur and X. J. Meng, 2005: Effects of porcine circovirus type 2 (PCV2) maternal antibodies on experimental infection of piglets with PCV2. Clin Diagn Lab Immunol, 12, 1347-1351.
33. Muhling, J., W. S. Raye, J. R. Buddle and G. E. Wilcox, 2006: Genetic characterisation of Australian strains of porcine circovirus types 1 and 2. Aust Vet J, 84, 421-425; discussion 416.
34. Neumann, E. J., S. S. Dobbinson, E. B. Welch and R. S. Morris, 2007: Descriptive summary of an outbreak of porcine post-weaning multisystemic wasting syndrome (PMWS ) in New Zealand. N Z Vet J, 55, 346-352.
35. O'Dea, M. A., M. J. Kabay, J. Carr, G. E. Wilcox and R. B. Richards, 2011: Porcine circovirus-associated disease in weaner pigs in Western Australia. Aust Vet J, 89, 122-130.
36. O'Neill, K., M. Hemann, L. Gimenez-Lirola, P. Halbur and T. Opriessnig, 2012: Vaccination of sows reduces the prevalence of PCV-2 viraemia in their piglets under field conditions. The Veterinary record, 171, 425-425.
37. Olvera, A., M. Cortey and J. Segales, 2007: Molecular evolution of porcine circovirus type 2 genomes: phylogeny and clonality. Virology, 357, 175-185.
38. Opriessnig, T., X. J. Meng and P. G. Halbur, 2007: Porcine circovirus type 2 associated disease: update on current terminology, clinical manifestations, pathogenesis, diagnosis, and intervention strategies. J Vet Diagn Invest, 19, 591-615.
39. Opriessnig, T., A. R. Patterson, D. M. Madson, N. Pal and P. G. Halbur, 2009a: Comparison of efficacy of commercial one dose and two dose PCV2 vaccines using a mixed PRRSV-PCV2-SIV clinical infection model 2-3-months post vaccination. Vaccine, 27, 1002-1007.
40. Plana-Duran, J., M. Balasch, J. Segales, C. Rosell, G. M. Rodriguez-Arrioja, M. Domingo, J. M. Folch, A. Sanchez and A. Mankertz, 1999: Post-weaning multisystemic wasting syndrome in Spain. Vet Rec, 145, 87-88.
41. Ramos, N., S. Mirazo, G. Castro and J. Arbiza, 2015: First identification of Porcine Circovirus Type 2b mutant in pigs from Uruguay. Infect Genet Evol, 33, 320-323.
42. Rodriguez-Arrioja, G. M., J. Segales, C. Rosell, A. Rovira, J. Pujols, J. Plana-Duran and M. Domingo, 2003: Retrospective study on porcine circovirus type 2 infection in pigs from 1985 to 1997 in Spain. J Vet Med B Infect Dis Vet Public Health, 50, 99-101.
43. Rose, N., T. Opriessnig, B. Grasland and A. Jestin, 2012: Epidemiology and transmission of porcine circovirus type 2 (PCV2). Virus Res, 164, 78-89.
44. Royer, R. L., P. Nawagitgul, P. G. Halbur and P. S. Paul, 2001: Susceptibility of porcine circovirus type 2 to commercial and laboratory disinfectants. Journal of swine health and production, 9, 281-284.
45. Segales, J., A. Olvera, L. Grau-Roma, C. Charreyre, H. Nauwynck, L. Larsen, K. Dupont, K. McCullough, J. Ellis, S. Krakowka, A. Mankertz, M. Fredholm, C. Fossum, S. Timmusk, N. Stockhofe-Zurwieden, V. Beattie, D. Armstrong, B. Grassland, P. Baekbo and G. Allan, 2008: PCV-2 genotype definition and nomenclature. Vet Rec, 162, 867-868.
46. Segales, J., A. Urniza, A. Alegre, T. Bru, E. Crisci, M. Nofrarias, S. Lopez-Soria, M. Balasch, M. Sibila, Z. Xu, H. J. Chu, L. Fraile and J. Plana-Duran, 2009: A genetically engineered chimeric vaccine against porcine circovirus type 2 (PCV2) improves clinical, pathological and virological outcomes in postweaning multisystemic wasting syndrome affected farms. Vaccine, 27, 7313-7321.
47. Seo, H. W., C. Park, K. Han and C. Chae, 2014: Effect of porcine circovirus type 2 (PCV2) vaccination on PCV2-viremic piglets after experimental PCV2 challenge. Vet Res, 45, 13.
48. Takahagi, Y., Y. Nishiyama, S. Toki, T. Yonekita, F. Morimatsu and H. Murakami, 2008: Genotypic change of Porcine circovirus Type 2 on Japanese pig farms as revealed by restriction fragment length polymorphism analysis. Journal of Veterinary Medical Science, 70, 603-606.
49. Tischer, I., D. Peters, R. Rasch and S. Pociuli, 1987: Replication of porcine circovirus: induction by glucosamine and cell cycle dependence. Arch Virol, 96, 39-57.
50. Vidigal, P. M., C. L. Mafra, F. M. Silva, J. L. Fietto, A. Silva Junior and M. R. Almeida, 2012: Tripping over emerging pathogens around the world: a phylogeographical approach for determining the epidemiology of Porcine circovirus-2 (PCV-2), considering global trading. Virus Res, 163, 320-327.
51. Wang, F., X. Guo, X. Ge, Z. Wang, Y. Chen, Z. Cha and H. Yang, 2009: Genetic variation analysis of Chinese strains of porcine circovirus type 2. Virus Res, 145, 151-156.
52. Woodbine, K. A., G. F. Medley, J. Slevin, A. L. Kilbride, E. J. Novell, M. J. Turner,