CHƯƠNG 2 : THỰC NGHIỆM
2.2. Dụng cụ, thiết bị và hóa chất
2.2.1. Dụng cụ và thiết bị chiết tách mẫu
Các dụng cụ và thiết bị dùng cho tách chiết và tinh chế chất sạch được sử dụng bao gồm:
- Bình chiết.
- Bình cầu cất quay
- Máy cất quay chân không.
- Cốc thuỷ tinh
- Máy sấy.
- Bình triển khai sắc ký.
- Cột sắc ký thuỷ tinh các kích cỡ.
- Bàn cắt, dao cắt bản mỏng.
- Bản sắc ký
- Bình nuôi cấy tế bào
- Phiến vi lượng 96 giếng, pipet pasteur
- Đầu týp cho micropipet
2.2.2. Dụng cụ thiết bị xác định cấu trúc
Phổ 1H-NMR (500 MHz) và 13C-NMR (125 MHz) được đo trên máy BRUKER Avante 500 với chất chuẩn nội TMS (Tetrametyl Silan) tại Viện Hóa học, Viện Hàn lâm Khoa học và Công nghệ Việt Nam.
Máy LC-MS Agilent 1260 series Single Quadrupole để đo phổ khối lượng được thực hiện tại Viện Hóa sinh biển, Viện Hàn lâm KHCNVN.
2.2.3. Hoá chất
Sắc ký bản mỏng phân tích: sử dụng bản nhôm tráng sẵn Silicagel 60 F254 (pha thường) và RP-18 F254 (pha đảo) độ dày 0,2 mm (Merck-Đức).
Sắc ký cột: Silicagel pha thường có cỡ hạt là 0,040-0,063 mm (240-430 mesh). Silicagel pha đảo YMC (30-50 m, Fujisilisa Chemical Ltd).
Dung môi chiết và chạy sắc ký: dung môi được sử dụng là:
n-Hexan
Ethyl acetate
Axeton
Dichloromethane
Nước
Môi trường DMEM (Dulbecco’s Modified Edgle Medium) hoặc
MEME (Minimum Essential Medium with Edgle’s salt) có bổ sung L- glutamine, Sodium piruvat, NaHCO3, PSF (Penicillin- Streptomycin sulfate - Fungizone); NAA (Non-Essential Amino Acids); 10% BCS (Bovine Calf Serum)
Tripsin-EDTA 0,05%; DMSO (Dimethyl Sulfoside); TCA
(Trichloro Acetic acid); Tris Base; PBS (Phosphate Buffered Saline); SRB (Sulfo Rhodamine B); Acid Acetic.
Các loại chất chuẩn có khả năng diệt tế bào: Ellipticine, Vinblastine hoặc Taxol pha trong DMSO.
Phát hiện vệt chất: đèn tử ngoại bước sóng 254 và 368 nm, thuốc thử H2SO4 10% hơ nóng từ từ đến khi vết chất hiện màu.
2.2.4. Dòng tế bào (cell lines)
- Dòng tế bào Hep-G2 (Human hepatocellular carcinoma – Ung thư gan)
- Dòng tế bào LU-1 (Human lung adenocarcinoma – Ung thư phổi)
- Dòng tế bào MCF-7 (Human bredst adenocarcinoma – Ung thư vú)
- Dòng tế bào HeLa (HeLa cervical cancer cells – ung thư cổ tử cung HeLa)