VỌNG TIẾT RA
Phương trình đường chuẩn sự biến thiên mật độ quang (OD) theo nồng độ N–acetyl-β-D-Glucosamine ở các ống được biểu diễn ở phụ hình 1.
Để đánh giá khả năng sinh tổng hợp chitinase của 6 chủng xạ khuẩn triển vọng, đề tài đã tiến hành xác định hàm lượng enzyme chitinase bằng phương pháp so màu với thuốc thử DNS để xác định nồng độ glucosamine trong quá trình phân giải chitin. Cơ chất chứa chitin sẽ bị enzyme chitinase của vi sinh vật phân giải tạo đường khử trong môi trường nuôi lắc. Nồng độ đường khử trong môi trường thể hiện hàm lượng của enzyme chitinase. Kết quả thí nghiệm được trình bày ở bảng 4.2.
Bảng 4.2 Hàm lượng chitinase (IU) của các chủng xạ khuẩn triển vọng tiết ra qua các thời điểm 3, 5, 7 và 9 ngày sau nuôi lắc (NSNL)
Chủng xạ khuẩn
Hàm lượng chitinase (IU/ml) của 6 chủng xạ khuẩn
3 NSNL 5 NSNL 7 NSNL 9 NSNL
TG19 22,59 c 39,52 c 12,90 d 8,57 c
BT19 32,17a 57,72a 107,8a 80,33a
BT16 4,67 e 17,13 e 12,32 d 3,71 e BL10 25,61 b 49,32 b 23,61 b 11,16 b VL9 15,55 d 23,51 d 14,94 c 4,943 e ĐT15 14,82 d 22,96 d 12,99 d 6,71 d Mức ý nghĩa ** ** ** ** CV % 3,55 2,26 1,93 3,58
Ghi chú: Các số trong cùng một cột theo sau bởi một hoặc nhiều chữ cái giống nhau thì khơng khác biệt qua phép kiểm định Ducan. **: Khác biệt ý nghĩa ở mức 1%.
Hình 4.1 Vịng phân giải chitin của 6 chủng xạ khuẩn ở thời điểm 7 NSBT TG19 BL10 BT19 VL9 ĐT15 BT16
29
Hàm lượng chitinase của 6 chủng xạ khuẩn được xác định ở thời điểm 3 NSNL biến động từ 4,67 – 32,17 IU/ml. Trong đó, chủng xạ khuẩn BT19 có hàm lượng chitinase là 32,17 IU/ml cao hơn và khác biệt ý nghĩa thống kê ở mức 1% so với các chủng xạ khuẩn còn lại. Chủng xạ khuẩn có hàm lượng chitinase thấp nhất là BT16 với hàm lượng chitinase là 4,67 IU/ml.
Ở thời điểm 5 NSNL, hàm lượng chitinase của các chủng xạ khuẩn có xu hướng tăng. Trong đó, chủng xạ khuẩn BT19 có hàm lượng chitinase cao nhất 57,72 IU/ml, cao hơn và khác biệt ở mức ý nghĩa 1% so với các chủng xạ khuẩn còn lại. Kế đến là chủng BL10 với hàm lượng chitinase tiết ra là 49,32 IU/ml. Chủng BT16 có lượng chitinase là 17,13 IU/ml, thấp nhất so với các chủng trên.
Tuy ở thời điểm 7 NSNL, hàm lượng chitinase của phần lớn chủng xạ khuẩn có xu hướng giảm. Nhưng riêng chủng BT19 vẫn tiếp tục tăng với lượng
chitinase tiết ra là 107,8 IU/ml, nhiều nhất và khác biệt ý nghĩa thống kê. Ba chủng xạ khuẩn TG19, BT16 và ĐT15 có hàm lượng chitinase thấp hơn lần
lượt là 12,9 IU/ml, 12,32 IU/ml và 12,99 IU/ml và khơng có sự khác biệt ý nghĩa với nhau.
Đến 9 NSNL, hàm lượng chitinase của các chủng xạ khuẩn đều giảm dao động từ 3,712 – 80,33 IU/ml. Trong đó, chủng BT19 vẫn duy trì hàm lượng chitinase tiết ra nhiều nhất là 80,33 IU/ml khác biệt ý nghĩa thống kê ở mức 1% so với các chủng còn lại. Hai chủng BT16 và VL9 là 2 chủng có lượng chitinase tiết ra thấp nhất.
Có thể thấy rằng, hàm lượng chitinase của các chủng xạ khuẩn tiết ra có sự thay đổi qua các thời điểm khảo sát. Trong đó, chủng xạ khuẩn BT19 có hàm lượng chitinase tiết ra cao nhất đạt tối đa 107,8 IU/ml ở thời điểm 5 NSNL. Bên cạnh đó, chủng xạ khuẩn BT16 có hàm lượng chitinase thấp nhất. Cũng bằng phương pháp so màu với thuốc thử DNS để xác định nồng độ Glucosamine trong quá trình phân giải chitin, Phạm Hoàng Vũ (2017) đã khảo sát khả năng tiết enzyme chitinase của các 4 chủng xạ khuẩn có hàm lượng chitinase là 20,358 IU/ml 36 giờ sau khi bố trí và hoạt độ chitinase là 1.02 IU/gCT, Nguyễn Vinh Hiển (2017) cũng xác định được hàm lượng chitinase của các chủng xạ khuẩn triển vọng tiết ra với hàm lượng chitinase đạt được trong khoảng từ 75,68 IU/ml đến 115,80 IU/ml ở 2 NSNL.
Như trên, kết quả định lượng chitinase tiết ra bởi các chủng xạ khuẩn trong mơi trường ISP-4 lỏng và kết quả định tính ở thí nghiệm 1 trên mơi trường chitin agar cho thấy chủng BT19 và BL10 vừa thể hiện khả năng phân giải cao với bán kính vịng phân giải (BKVPG) lần lượt là 28 mm và 26,13 mm ở thời
30
điểm 9 NSBT, vừa có hàm lượng chitinase cao lần lượt là 57,72 IU/ml và 49,32 IU/ml ở 5 NSNL. Kết quả nghiên cứu của Julaluk et al. (2012) cho kết quả
thành tế bào của nấm Fusarium oxusporum bị phá vỡ ngày càng tăng do Streptomyces sp. P4 đã tiết ra các enzyme thủy phân trong đó có chitinase đóng
vai trị quan trọng trong việc ức chế sự phát triển của nấm. Theo Prapagdee et el. (2008) đã nghiên cứu ra chủng Streptomyces hygroscopicus SRA14 tiết ra
hàm lượng chitinase tương đối cao (5,2 IU/mg) trong ngày đầu tiên sau khi cấy.