- Kết quả phân tích mẫu chuyển gen có xử lý trước sóng siêu âm:
KẾT LUẬN
Đã thu nhận một số chồi in vitro kháng được kanamycin ở độ 20mg/l trên môi
trường tái sinh bổ sung TDZ 1,5mg/l, 2-4D 0,2mg/l, thông qua phương pháp
chuyển gen nhờ vi khuẩn Agrobacterium kết hợp xử lý sóng siêu âm.
Kết quả hóa mô cho thấy sự hiện diện của gengusA.
Gen npt II mã hóa cho enzyme neomycine phosphotransfer ase, tạo tính kháng kanamycin đãđược kiểm tra bằng kỹ thuật PCR.
TÀI LIỆU THAM KHẢO
1. Thông tin Khoa học Công nghệ Lâm Đồng, số 4 (2002).
2. Nguyễn Văn Uyển (1995). Những ph ương pháp công nghệ sinh học thực vật, tập 1
& 2. NXB Nông nghiệp,Thành phố Hồ Chí Minh.
3. Murashige T., Skoog F. (1962). A revised medium for rapid growth and bioassay with tobacco tissue cultures. Plant Physiol 15: 473-497.
4. Jame, D. J. et al. (1990). Agrobacterium-mediated transformation of the cultivated
strawberry (Fragaria x ananassa Duch.) using disarmed binary vector. Plant
Science 69: 79-94.
5. Nehra, M. S. et al. (1990a). Agrobacterium-mediated transformation of strawberry calli and recovery of tran sgenic plants. Plant Cell Reports 9:10-13.
6. Nehra, M. S. et al. (1990b). Genetic transformation of strawberry by Agrobacterium tumefaciens using leaf disk regeneration system. Plant Cell Reports 9: 293-298.
Hình 2. Sự biểu hiện tạm thời của gen gusA thông qua phương pháp
hóa mô
Hình 3. Kết quả PCR đối với gen kháng kanamycin (nptII). TC: Thang chuẩn DNA (1kb). 0: Plasmid pCAMBIA 2301. 1: M ẫu không chuyển gen. 2,3: Mẫu chuyển gen
7. Graham, J. et al. (1995). Agrobacterium-mediated transformation of soft fruit Rubus, Ribes and Fragaria. Methods in Molecular Biology , Humana Press, Totowa, N. J. 44: 129-133.
8. Trick, H. N. and Finer, J. J. (1997). SAAT: Sonication Assisted Agrobacterium- mediated Transformation. Transgenic Research 6:329-336.
9. Liu, Z. R. and Sanford, J. C. (1998). Plant regeneration by organogenesis from strawberry leaf and runner tissue. HortScience 23:1057-1059.
10. Haymes, K. M. and Davis, T. M. (1998). Agrobacterium-mediated transformation Fragaria vesca, and transmission of transgenes to R1 progeny. Plant Cell Reports 17: 279-283.
11. Barcelo, M. et al. (1998). Regeneration and transformation via Agrobacterium tumefaciens of the strawberry cultivar Chandler. Plant Cell, Tissue and Organ Culture 54: 29-36, 1998.
12. Yan Zhao, Qingzhong and Davis, R. E. (2004). Transgene expression in strawberries driven by a heterologous phloem -specific promoter. Plant Cell Reports 23:224-230.
13. Nhut, D. T. et al. (2005). Callus formation, shoot proliferati on and rooting by liquid culture: A novel efficient method for rapid propagation of strawberry
(Fragaria vesca L.). Proceedings of Vietnam -Korea International symposium
2005 on Biotechnology and Biosystem Engineering , 96-100, HCMC Uni. of Agriculture and F orestry.
SUMMARY
Leaf disk transformation system of strawberry ( Fragaria
vesca L.) using the sonication assisted Agrobacterium method
Mai Truong, Le Tan Duc, Nguyen Huu Ho
Institute of Tropical Biology
Leaf disk regeneration system of strawberry ( Fragaria vesca L.) was carried out
using modified Murashige and Skoog medium ( 1962) with TDZ 1,5 mg.l-1 and 2,4-D 0,2 mg.l-1. Transformation works were performed via Agrobacterium tumefaciens containing the plasmid pCAMBIA 2301 with gusA and npt II genes. Leaf explants were
pretreated with sonication in 3 seconds by Transsonic 660 unit and a 2 days of
Agrobacterium co-cultivation. After a 45-day culture under the pressure of kanamycin
20 mg.l-1 as a selective agent, shoot regeneration was recovered on the med ium with TDZ 1,5 mg.l-1, 2,4-D 0,2 mg.l-1. The transformation frequency is low with percentage
of 1.33. Histochemical GUS assay and PCR analysis showed the presense of gusA and