D. farinae có nguồn gốc từ Mỹ làm chỉ thị phân tử chuẩn để so sánh.
VỚI CÁC CHỦNG CỦA MỸ VÀ THẾ GIỚI 3.2.1 Đặt vấn đề
3.2.1. Đặt vấn đề
Mạt nhà, trong đó đặc biệt là hai loài Dermatophagoides pteronyssinus
Trouessart 1897 (Dp) và Dermatophagoides farinae Hughes (Df), thuộc họ
Pyroglyphidae, có vai trò chính gây dị ứng đối với cộng đồng trên toàn thế giới (Fleming, 1999; Suarez-Martinez và cs, 2005). Giám định loài mạt nhà, cho đến gần
đây, chủ yếu vẫn dựa vào đặc điểm hình thái học và một số phân biệt kiểu hình phát triển của ấu trùng, mà không phải loài nào cũng dễ dàng phân biệt được (Teplitsky và cs, 2008). Chỉ có 3 loài là D. pteronyssinus, D. farinae và Euroglyphus maynei (họ
Pyroglyphidae) có vẻ dễ phân biệt hình thái nhưng nhiều khi cũng nhầm lẫn với nhau và với các loài khác, ảnh hưởng đến chất lượng dị nguyên sản xuất (Suarez-Martinez và cs, 2005). Phương pháp giám định sinh học phân tử cho phép xác định chính xác loài dựa trên chuỗi gen chọn lọc làm chỉ thị phân tử, mà một trong số đó là gen 12S của hệ gen ty thể và chỉ thị này đã được sử dụng trong giám định phân loại, xác định quan hệ phả hệ của nhiều loài vi chân đốt thuộc lớp Arachnida (Suarez-Martinez và cs, 2005).
Chúng tôi đã giải trình trình tự phân tích chuỗi gen 12S và cox1, của các loài mạt chuẩn sinh học nhận được từ hãng Biopol (Mỹ), để làm chuỗi so sánh trong giám
định gen các lô mạt sản xuất dị nguyên tại Việt Nam (Lê Thanh Hòa và cs, 2009). Chúng tôi trình bày kết quả giám định gen một số lô của loài mạt nuôi tại Việt Nam
đang sử dụng làm nguồn sản xuất dị nguyên điều trị dịứng và khẳng định chắc chắn về phân loại học đó là loài Dermatophagoides pteronyssinus Trouessart 1897. Phương pháp giám định gen bằng giải trình tự và phân tích chuỗi gen 12S sẽ là công cụ cần thiết trong xác định acarien tại Việt Nam đối với các lô giống sản xuất dị
Tóm tắt nhóm kết quả II
Đoạn gen 12S (395 bp) hệ gen ty thể của loài mạt làm dị nguyên tại Việt Nam (ký hiệu DpT4) được thu nhận bằng PCR, tách dòng và giải trình trình tự. Chuỗi gen
được phân tích tương đồng và phả hệ trên cơ sở so sánh với các chủng
Dermatophagoides pteronyssinus Trouessart 1897, Dermatophagoides farinae
Hughes và Blomia tropicalis củathế giới. Kết quả cho thấy, trình tự gen 12S thu nhận từ 2 dòng mạt, DpT4(117)VN và DpT4(118)VN của Việt Nam có tương đồng 98- 99% với các chủng thuộc loài D. pteronyssinus của Mỹ, trong khi đó chỉ có 84-85% với D. farinae và 68-69% với một số chủng của loài mạt B. tropicalis. Loài mạt nuôi tại Việt Nam (lô DpT4) đang sử dụng để chế kháng nguyên dị ứng được giám định phân tử chính xác là Dermatophagoides pteronyssinus Trouessart 1897, trên cơ sở
phân tích và so sánh với chỉ thị phân tử 12S từ các mẫu chuẩn quốc tế. Phân tích phả
hệ cũng cho thấy các dòng DpT4(117)VN và DpT4(118)VN của Việt Nam thuộc nhóm Dermatophagoides (Dp và Df) trong khi đó nhóm B. tropicalis tách làm thành một nhóm riêng. Cơ sở của giám định gen đã khẳng định loài acarien của Việt Nam là
D. pteronyssinus (vị trí phân loại: Animalia, Arthropoda, Arachnida, Acarina, Acariformes, Pyroglyphidae, Dermatophagoides, Dermatophagoides pteronyssinus
Trouessart, 1897).