B. NỘI DUNG LUẬN ÁN
2.4.1. Xác định khối lượng phân tử (KLPT) trung bình
Phương pháp sắc ký gel thấm qua (gel permeation chromatography, viết tắt là GPC) là một loại sắc ký loại trừ kích thước (SEC) phân tách các chất phân tích dựa trên kích thước. Khi mô tả polyme, điều quan trọng là phải xem xét độ phân tán (PDI) cũng như khối lượng phân tử. Các loại khối lượng phân tử polyme bao gồm: KLPT trung bình số (Mn), KLPT trung bình khối lượng (Mw), KLPT trung bình (Mz). GPC cho phép xác định PDI, Mn, Mw và Mz. Cơ chế phân tán được thể hiện trong Hình 2.2 [114].
Hình 2.2. Mô tả cơ chế phân tách chất, sử dụng kỹ thuật GPC Nguyên lý của phương pháp GPC
Trong sắc ký gel thấm qua, pha tĩnh là mạng polyme có lỗ rỗng; các lỗ rỗng này được phủ đầy dung môi dùng làm pha động. Một hỗn hợp gồm nhiều hợp chất có KLPT khác nhau có thể tách riêng được hay không là tuỳ vào kích thước của các lỗ rỗng đó.
Các phân tử có kích thước lớn hơn kích thước lỗ rỗng, không thể chui lọt vào bên trong thì sẽ nhanh chóng theo dòng chảy của pha động đi ra khỏi cột. Các phân tử có KLPT nhỏ hơn kích thước lỗ rỗng, sẽ toàn phần hay bán phần lọt vào lỗ rỗng, và cuối cùng rồi cũng theo dòng chảy đi ra khỏi cột nhưng sẽ chậm trễ hơn.
Dòng chảy pha động khiến các phân tử lớn không thể chui vào lỗ rỗng của mạng gel, nhanh chóng đi xuyên qua cột, ra khỏi cột, trong khi phân tử nhỏ ra khỏi cột lâu hơn vì còn chui vào và đi ra khỏi lỗ rỗng của gel. Như vậy, các thành phần khác nhau của hỗn hợp mẫu khi đi ngang qua cột sắc ký gel, sẽ ra khỏi cột lần lượt theo trình tự KLPT lớn đi ra khỏi cột trước, phân tử nhỏ đi ra khỏi cột sau.
Phương pháp GPC được thực hiện trên máy LC-20AB Shimadzu, Nhật, sử dụng detector RID - 10A và cột Ultrahydrogel 250, 500 của hãng Waters, Mỹ, tại Viện Khoa học Vật liệu Ứng dụng - Viện Hàn lâm khoa học Việt Nam tại Tp. Hồ Chí Minh.