L ỜI CẢM ƠN
2.2.3. Chiết γ-oryzanol từ soapstock
a. Lựa chọn dung môi chiết γ-oryzanol từ soapstock
Dung môi thích hợp dùng để chiếtγ-oryzanol phải là dung môi hòa tan tốt γ- oryzanol. Nhằm chọn được dung môi phù hợp, trước hết thửđộ tan của γ-oryzanol trong một loạt các dung môi được kiểm chứng như sau:
– Hòa tan 2.4 gam γ-oryzanol trong 25 ml dung môi: MeOH, EtOH, EtOAc,
điethyl ete (C2H5)2O, aceton, ACN, tetra hidrofuran (THF), H2O. Sau khi kiểm tra
độ tan của γ-oryzanol trong các dung môi trên, căn cứ vào nhiệt độ sôi và độ tan để
chọn dung môi phù hợp.
– Dung môi được lựa chọn là EtOAc.
b. Chiết γ-oryzanol từ soapstock
Mẫu soapstock thường được chiết theo hai cách.
@ Cách thứ nhất: Chiết mẫu ướt với dung môi là EtOAc (sử dụng bồn rửa siêu âm Elma 38 kHz, ở nhiệt độ thường).
Lấy 10 gam soapstock cho vào các bình Erlenmeyer 250 ml, sau đó thêm 100 ml dung môi EtOAc. Đặt bình này vào trong bể siêu âm Elma (38 kHz) và siêu âm trong 20 phút, thu được các hỗn hợp tương đối đồng nhất. Lọc và thu lấy các dịch chiết EtOAc (sau khi siêu âm, dịch chiết thu được còn 80 ml).
Hàm lượng axit ferulic và γ-oryzanol trong mẫu soapstock được tính: (mg) mST * 1000 * (mL) V * (mg/L) C (%) F m =
Trong đó, C: nồng độ axit ferulic hoặc γ-oryzanol tính theo ppm (mg/l) V: thể tích dịch chiết (80 ml)
F: độ pha loãng (F = 10)
mST: khối lượng soapstock ban đầu dùng để chiết (10,000 mg).
@ Cách thứ hai: Mẫu soapstock được sấy khô ở 105ºC cho tới khi khối lượng không đổi. Mẫu khô được chiết như sau:
Cho 30 ml dung dịch EtOAc vào 1.4 g soapstock khô (thu được từ 3 gam soapstock ướt) trong bình Erlenmeyer 250 ml, đặt siêu âm trong bể Elma 38 kHz, trong thời gian 20 phút. Lọc thu lấy dịch chiết và định mức tới vạch trong bình định mức 50 ml bằng EtOAc. Một lượng nhỏ mẫu được đem đi phân tích bằng máy sắc ký lỏng cao áp HPLC.
Trong đề tài này chúng tôi thực hiện việc chiết mẫu theo cả hai cách, và lựa chọn một trong hai cách để tiến hành các nghiên cứu tiếp theo.
Để điều chế FA, chúng tôi thực hiện phản ứng với khối lượng soapstock lớn (khoảng 96 gam cho một lần điều chế), như hình 2.3. Phần dịch chiết được cất quay dưới áp suất thấp để đuổi bớt dung môi. Phần dung môi thu được khi cô quay ở lần chiết trước được tận dụng để chiết tiếp lần sau. Phần dịch chiết thu được sau cô quay có thể tích là 60 ml, trong đó nồng độ γ-oryzanol đạt gần đúng là 48 mg/ml. Dịch chiết này (gọi là dịch chiết GO) sẽ được thủy phân trong điều kiện thích hợp
Hình 2.3. Sơđồ chiết γ-oryzanol từ soapstock
c. Nghiên cứu ảnh hưởng của tỉ lệ dung môi/soapstock (V/m) đến hiệu suất của quá trình chiết γ-oryzanol
Lấy 10 gam soapstock cho vào các bình Erlenmeyer 250 ml có nắp vặn khác nhau. Dung môi EtOAc với các thể tích khác nhau 10, 20, 50, 100 ml được rót vào các cốc có dãn nhán tương ứng với các tỉ lệ dung môi/rắn (V/m) là 1, 2, 5, 10. Đặt các bình này vào trong bể siêu âm Elma (38 kHz) và siêu âm trong 20 phút, thu
được các hỗn hợp tương đối đồng nhất. Lọc và thu lấy các dịch chiết EtOAc, đưa lần lượt vào các bình định mức 100 ml có nhãn tương ứng, định mức bằng EtOAc tới vạch.
d. Nghiên cứu ảnh hưởng của thời gian siêu âm đến hiệu suất của quá trình chiết γ-oryzanol
Lấy 10 gam soapstock và 50 ml EtOAc cho vào các bình Erlenmeyer 250 ml có nắp vặn khác nhau, dán nhãn. Đặt lần lượt các bình này vào trong bể siêu âm Elma (38 kHz) với thời gian siêu âm lần lượt là 10, 15, 20, 30 phút, thu được các
96 gam soapstock Dung dịch A Dịch chiết GO (EtOAc) 60 ml dịch chiết GO 1) 120 ml EtOAc 2) siêu âm 20 phút Lọc
Cô quay chân không
Phân tích hàm lượng γ-oryzanol
hỗn hợp tương ứng. Lọc và thu lấy các dịch chiết EtOAc, đưa lần lượt vào các bình
định mức 100 ml có nhãn tương ứng, định mức bằng EtOAc tới vạch.