L ỜI CẢM ƠN
3.5. TÁCH VÀ TINH CHẾ AXIT FERULIC TỪ HỖN HỢP PHẢN ỨNG THỦY
Hỗn hợp sau phản ứng là một hỗn hợp đồng nhất màu vàng nâu bao gồm: - Sản phẩm chính: FA ở dạng muối K
- γ-oryzanol còn lại chưa bị thủy phân hết. - Kiềm KOH dư (pH sau phản ứng >10)
- Hỗn hợp các hợp chất trong soapstock bị đồng thủy phân trong quá trình phản ứng (các muối của axit béo,…)
Do hỗn hợp sau phản ứng có chứa rất nhiều hợp chất, và trong suốt quá trình phản ứng, hệ luôn tồn tại trong trạng thái đồng nhất do sử dụng đồng dung môi EtOH, do vậy, chúng tôi đã sử dụng quá trình làm phân tách 2 pha được áp dụng như sau:
ü Thêm n-Hex/H2O (tỉ lệ 1:5, tương đương 160 ml n-hex và 800 ml H2O) vào 160 ml hỗn hợp sau phản ứng để quá trình phân lớp xảy ra, có sử dụng bể siêu âm Elma 38 kHz để quá trình phân lớp tốt hơn. Quan sát thấy sự phân lớp 2 pha khá rõ rệt (một lượng mẫu nhỏ thể hiện trên hình 3.11):
- Lớp phía trên (Lớp A): bao gồm các hợp chất không phân cực, tan trong n-hex và EtOAc.
- Lớp phía dưới (Lớp B, 900 ml): bao gồm các hợp chất phân cực, tan trong nước và EtOH.
Hình 3.11. Sự tách pha sau khi thêm n-hex/H2O
Sau khi tách lớp n-hex bằng phễu chiết, bắt đầu tiến hành kết tủa FA bằng cách thêm dung dịch H2SO4 như đã mô tả trong mục 2.2.5. Axit ferulic, muối K2SO4 cùng các tạp chất kết tủa trắng nhưđược mô tả trong hình 3.12.
Hình 3.12. Axit ferulic kết tủa trắng cùng các tạp chất khác sau khi thêm H2SO4
Để thu được FA, ta cần axit hóa dung dịch lớp B tới khi pH < 7, nhằm đảm bảo FA đã được kết tủa hoàn toàn. Trong khuôn khổ luận văn này, chúng tôi sử
dụng phương pháp chiết để thu lại FA. Vì lượng muối vô cơ (KOH được sử dụng rất dư vì phản ứng xảy ra khó khăn, dịch chuyển cân bằng về phía bên phải) và các tạp chất khá lớn so với lượng FA sau quá trình axit hóa, nên việc tinh chế FA bằng cách loại rửa kết tủa không khả thi.
Do vậy, chúng tôi tiến hành chiết FA từ dung dịch lớp B bằng EtOAc theo quy trình 2.4 và tiếp tục nghiên cứu, kiểm tra hàm lượng FA cũng nhưđộ tinh khiết của các dịch chiết này trong các bước tiếp theo.
3.6. KẾT QUẢ THĂM DÒ ĐỘ SẠCH CỦA DỊCH CHIẾT CHỨA AXIT FERULIC BẰNG SẮC KÝ BẢN MỎNG