6. Cấu trúc luận văn
2.4.2. Định tính và định lượng tanin
Tiến hành định tính xác định sự có mặt của tanin trong dịch chiết ra và dùng phản ứng Stiasny định tính phân biệt tanin thuộc nhóm tanin ngưng tụ và tanin thủy phân.
Định lượng nhóm tanin tách ra từ mẫu nguyên liệu ban đầu và từ mẫu tanin rắn bằng phương pháp Lowenthal.[3]
a.Định tính phân biệt nhóm tanin ngưng tự và nhóm tanin thủy phân
Cách tiến hành: chuẩn bị 1 bản sứ có lỗ, cho vào lỗ bản sứ một ít dịch chiết tanin từ vỏ keo. Nhỏ vào đó vài giọt FeCl3 5%, nếu hỗn hợp chuyển sang màu xanh đen là phản ứng dương tính.
Cách tiến hành: cho 50ml dịch lọc vào bình tam giác dung tích 250ml, cho thêm vào 10ml HCHO 37% và 5ml HCl đậm đặc. Đun cách thủy trong thời gian 20 phút, nếu xuất hiện kết tủa vón màu đỏ thì có nhóm tanin ngưng tụ. Lọc bỏ kết tủa lấy dịch lọc cho dung dịch CH3COONa dư vào, rồi thêm vài giọt dung dịch FeCl3 nếu có màu xanh xuất hiện thì có nhóm tanin thủy phân.
b.Định lượng nhóm tanin theo phương pháp Lowenthal
* Nguyên tắc: nhóm tanin dễ bị oxy hoá bởi KMnO4 trong môi trường axit với chất chỉ thị sunfoindigocacmin sẽ tạo thành CO2 và H2O, đồng thời làm mất màu xanh của sunfoindigocacmin. Quá trình trên có thể biểu diễn bằng sơ đồ phản ứng sau:
Tanin + KMnO4 Indigocacmin, H2SO4 CO2 + H2O
Cách tiến hành:
* Pha dung dịch KMnO4: Pha 1 lít dung dịch KMnO4 0,1 N: Cân chính xác 3,101 gam KMnO4 rắn cho vào bình định mức 1000 ml, thêm nước cất cho đến vạch, lắc đều để tan hoàn toàn.
* Pha chỉ thị sunfoindigocacmin: Pha 1 lít dung dịch: Cân chính xác 1
gam indigocacmin cho vào cốc thủy tinh 100 ml, thêm vào 25 ml dung dịch H2SO4 đậm đặc. Đậy nắp, để vào chỗ tối qua một đêm hoặc ít nhất là 4h để hòa tan hết indigocacmin. Chuyển toàn bộ sang bình định mức 1000 ml đã có sẵn một ít nước cất. Dùng nước cất tráng nhiều lần cốc đựng indigocacmin và
thêm nước cất đến vạch. Lắc đều, bảo quản dung dịch pha được trong bình đựng màu đen.
* Định lượng tanin: Cân 100 gam bột nguyên liệu, cho vào bình cầu,
thêm vào đó nước cất. Đặt vào bếp cách thuỷ, đun cách thuỷ. Lấy ra để yên khoảng 5 phút, lọc qua giấy lọc vào bình định mức 1000 ml. Tiếp tục chiết như trên từ 3 – 4 lần cho đến khi dịch chiết trắng trong hoặc không còn phản ứng với FeCl3 là được. Dùng nước cất định mức đến vạch, lắc đều.
Chuẩn bị hai bình tam giác (V = 250 ml), một bình dùng làm thí nghiệm và một bình làm đối chứng.
Hình 2.4. Bộ thí nghiệm chiết tách tanin
Dùng pipet hút dịch chiết, cho vào mỗi bình 10 ml dịch chiết.
Bình thí nghiệm: cho thêm 75 ml nước cất đun sôi, 25 ml dung dịch indigocacmin 0,1% trong môi trường axit. Chuẩn độ bằng KMnO4 0,1N cho đến khi mất màu xanh, chuyển sang màu vàng rơm là được. Mỗi thí nghiệm cần lặp lại 3 lần để lấy kết quả trung bình.
Bình đối chứng: cho thêm một thìa nhỏ than hoạt tính, lắc đều, đun cách thủy khoảng 15 phút, lọc qua giấy lọc. Dùng 75 ml nước cất nóng, chia thành 3 lần để tráng bình, giấy lọc … dịch lọc thu được phải trắng trong không còn màu vàng. Tiến hành các bước thí nghiệm giống như bình thí nghiệm. Ghi lại lượng KMnO4 0,1N chuẩn độ ở bình đối chứng và bình thí nghiệm.
Tính toán: hàm lượng tanin trong mẫu được tính theo công thức sau:
Trong đó:
X: hàm lượng tanin xác định trên khối lượng chất khô (%). a: lượng KMnO4 chuẩn độ ở bình thí nghiệm (ml).
b: lượng KMnO4 chuẩn độ ở bình đối chứng (ml). V: thể tích toàn bộ dịch chiết (250 ml).
v: thể tích dịch chiết dùng để phân tích (10 ml). c: khối lượng mẫu đem phân tích (gam).
k: hệ số tanin = 0,00582 (cứ 1 ml KMnO4 0,1N tương ứng với 0,00582 gam tanin).
100: tính ra % tanin
Hình 2.5. Tanin trước và sau chuẩn độ Hình 2.6. Mẫu đối chứng