CHƢƠNG 2 NGUYÊN LIỆU VÀ PHƢƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU
2.3.4. Kĩ thuật sắc kí bản mỏng
a. Nguyên tắc
- Phƣơng pháp sắc kí lớp mỏng đƣợc dùng chủ yếu để định tính, ngồi ra cịn để thử tinh khiết và đơi khi để bán định lƣợng hoặc định lƣợng hoạt chất thuốc.
- Đại lƣợng đặc trƣng quan trọng về mức độ tách là hệ số di chuyển Rf đƣợc tính bằng tỉ lệ giữa khoảng dịch chuyển của chất thử và khoảng dịch chuyển của dung mơi:
Trong đĩ:
a là khoảng cách từ điểm xuất phát đến tâm của vết mẫu thử, tính bằng cm.
b là khoảng cách từ điểm xuất phát đến mực dung mơi đo trên cùng đƣờng đi của vết, tính bằng cm.
Rf chỉ cĩ giá trị từ 0 đến 1 [8].
Khi Rf bằng 0 thì chất tan hồn tồn khơng di chuyển, cịn khi Rf bằng 1 thì chất tan di chuyển bằng tốc độ của dung mơi.
- Cĩ nhiểu yếu tố ảnh hƣởng đến Rf nhƣng quan trọng là: + Chất lƣợng và hoạt tính chất hấp phụ (loại bản mỏng). + Bề dày của lớp mỏng.
+ Chất lƣợng và độ tinh khiết của pha động.
+ Lƣợng mẫu chấm lên bản nhiều hay ít cũng làm vị trí của vết trên bản thay đổi.
b. Lựa chọn dung mơi chạy cột sắc kí
Để lựa chọn dung mơi hay hệ dung mơi chạy cột sắc kí silicagel dựa vào sắc kí bản mỏng với các bƣớc sau:
- Hịa tan một lƣợng nhỏ cao chiết trong dung mơi Chloroform.
- Chuẩn bị một số bản mỏng rồi dùng ống mao quản chấm dung dịch mẫu lên trên mỗi tấm với lƣợng tƣơng đƣơng nhau.
- Mỗi bản mỏng đƣợc chạy với các dung mơi và hệ dung mơi cĩ độ phân cực khác nhau nhƣ: Chloroform, Acetone, Diethyl eter, Ethyl acetace, Acid acetic, Chloroform/ Ethyl acetace, Acetone/ Ethyl acetace,...với các tỉ lệ khác nhau (khi thử với hệ dung mơi).
- Hiện hình dƣới đèn UV. Bản mỏng nào cĩ sự tách vết rõ rệt, các vết nằm trong khoảng 1/3 đến 2/3 chiều dài bản mỏng thì dung mơi hay hệ dung mơi tƣơng ƣng đĩ thích hợp để chạy cột sắc kí.