System
DNA vi khuẩn được tách chiết theo bộ kít Wizard® SV Genomic DNA Purification System (Promega) với các bước tiến hành như sau:
- Các chủng vi khuẩn được hoạt hóa trên môi trường tăng sinh chọn lọc RV và ủ ở 42oC trong 24 giờ.
- Lắc đều canh khuẩn, hút 1,5 ml dịch tăng sinh cho vào ống Eppendort 1,5 ml vô trùng.
- Ly tâm 13000 vòng trong 2 phút, loại bỏ phần dịch nổi bên trên, rửa cặn tế bào 2 lần bằng đệm TE 1X rồi ly tâm với chế độ như trên để loại bỏ phần dịch nổi. - Sau đó thêm vào 275 µl dung dịch phá tế bào vào mỗi ống, vortex đều.
GVHD: TS. Phạm Thu Thủy SVTH: Võ Thị Hà Thành phần Thể tích (µl) Đệm TE 10:1 200 EDTA 0,5 M (pH 8,0) 50 Protease K 20 mg/ml 20 Rnase A 4 mg/ml 5 Tổng 275
- Ủ ống mẫu trên block nhiệt ở 55oC trong 2 giờ.
- Thêm 250 µl dung dịch đệm (Wizard SV Lysis Buffer) vào mỗi ống, sau đó đem vortex nhẹ.
- Spin nhẹ, thu phần dịch nổi ở mỗi ống sang các cột Wizard SV Minicolumn (được đặt trên các ống thu mẫu 1,5 ml).
- Ly tâm 13000 vòng trong 2 phút, loại bỏ dịch thu được.
- Chuyển các cột Wizard SV Minicolumn sang các ống thu mẫu 1,5 ml mới. - Thêm vào 650 µl dung dịch rửa (Wizard SV Wash Solution).
- Ly tâm 13000 vòng 2 phút, loại bỏ phần dung dịch rửa thu được. - Lặp lại bước rửa này thêm 1 lần nữa.
- Chuyển cột Wizard SV minicolumn sang một Eppendorf 1,5 ml mới. - Thêm vào 100 µl dung dịch đệm TE 1X, ly tâm ở 13000 vòng trong 2 phút. - Cột Wizard SV Minicolumn được loại bỏ, dịch chiết DNA được thu nhận. - Dịch chiết DNA được bảo quản ở - 20oC cho đến khi sử dụng.