2.3.1. Nghiờn cứu một số đặc điểm sinh học sinh sản của tụm chõn trắng trong điều kiện nuụi nhõn tạo.
2.3.1.1. Nghiờn cứu sự phỏt triển buồng trứng và sức sinh sản của tụm chõn trắng trong điều kiện nuụi vỗ.
* Điều kiện thớ nghiệm:
- Tụm cỏi tuyển chọn thớ nghiệm cú sức khỏe tốt và chƣa phỏt triển buồng trứng, đƣợc phõn chia thành ba nhúm kớch thƣớc: 35-40g/con, 41-45g/con và 46-50 g/con. Mỗi nhúm kớch thƣớc gồm 100 cỏ thể và đƣợc nuụi riờng trong từng bể xi-măng cú thể tớch 5,8 m3. Mật độ thả 100 con/bể.
- Điều kiện nuụi vỗ: Nhiệt độ 27–30oC, pH 7,7– 8,4, độ mặn 28–32 ‰ và chế độ quản lý chăm súc đƣợc thực hiện nhƣ nhau cho cỏc bể thớ nghiệm.
- Thức ăn sử dụng gồm: Mực (50%), tụm ký cƣ (25%) và giun nhiều tơ (25%), với khẩu phần ăn chiếm 10-20% khối lƣợng thõn/ngày. Tụm đƣợc cho ăn 3 lần/ngày vào 6 giờ, 17 giờ và 21 giờ hàng ngày.
* Bố trớ thớ nghiệm: Đƣợc thể hiện nhƣ Hỡnh 2.3
Hỡnh 2.3: Thớ nghiệm xỏc định sức sinh sản của tụm chõn trắng (số liệu trỡnh bày là giỏ trị trung bỡnh ± độ lệch chuẩn)
* Cỏc chỉ tiờu theo dừi:
Tụm cỏi đĩ đƣợc tuyển chọn Nhúm tụm 35-40g/con (W=37,7 2,1g/con; BL=14,3 0,8 cm) Nhúm tụm 41-45 g/con (W=42,3 1,5g/con; BL=14,7 0,2 cm) Nhúm tụm 46-50 g/con (W=49,7 2,6g/con; BL=15,7 0,4 cm)
- Mỗi nhúm kớch thƣớc cú 100 con tụm; chăm súc, quản lý nhƣ nhau.
- Theo dừi quỏ trỡnh phỏt triển của buồng trứng; giải phẫu và cho đẻ (khi buồng trứng ở giai đoạn IV) để xỏc định cỏc chỉ tiờu sức sinh sản của tụm
- Theo dừi và đỏnh giỏ hàng ngày vào lỳc 17 giờ quỏ trỡnh phỏt triển buồng trứng theo thang 5 bậc của Tuma (1976) [5]; Trờn cơ sở làm tiờu bản lỏt cắt buồng trứng theo phƣơng phỏp của Sheckan và Hrapchack (1980): Tuyến sinh dục đƣợc cố định bằng dung dịch formol 10%, loại bỏ nƣớc bằng ethanol và làm sạch bằng xylene. Sau đú đỳc trong paffafin và cắt lỏt mỏng từ 4-6àm bằng mỏy cắt microtome. Nhuộm màu bằng hematocycline và eosin. Quan sỏt tiờu bản bằng kớnh hiển vi quang học cú độ phúng đại 150-600 lần.
- Xỏc định sức sinh sản tuyệt đối, sức sinh sản tƣơng đối, sức sinh sản thực tế; - Xỏc định tƣơng quan giữa sức sinh sản tuyệt đối và kớch thƣớc của tụm.
2.3.1.2. Sự phỏt triển phụi của trứng và biến thỏi ấu thể tụm chõn trắng
Xỏc định thời gian phỏt triển phụi của trứng và thời gian chuyển giai đoạn của ấu trựng tụm chõn trắng từ Zoea đến PL. Quy ƣớc tại thời điểm cú 50% số lƣợng trứng hoặc ấu trựng chuyển từ giai đoạn này sang giai đoạn khỏc đƣợc coi là thời điểm chuyển giai đoạn của chỳng.
2.3.1.3. Xỏc định kớch thước thành thục lần đầu của tụm chõn trắng mẹ
Tổng số mẫu đĩ phõn tớch chỉ tiờu kớch thƣớc thành thục lần đầu là 180 mẫu. Mỗi nhúm kớch thƣớc (6 nhúm) đƣợc phõn tớch 30 mẫu.
Cỡ cỏ thể khi tuyến sinh dục thành thục lần đầu đƣợc biểu diễn bằng đồ thị trờn đƣờng cong của phần trăm số cỏ thể đang thành thục, đĩ thành thục hoặc sau khi đẻ theo chiều dài. Điểm trờn đƣờng cong mà tại đú 50% số cỏ thể thành thục sinh dục đƣợc dựng làm chỉ số cho sự thành thục sinh dục lần đầu. Hoặc dựa vào kớch thƣớc nhỏ nhất mà ở đú tần số bắt gặp cỏ thể cú tuyến sinh dục ở giai đoạn II-IV đạt từ 50% trở lờn [2].
2.3.2. Nghiờn cứu kỹ thuật sản xuất giống nhõn tạo tụm chõn trắng
2.3.2.1. Ảnh hưởng của loại thức ăn đến sự thành thục của tụm chõn trắng
Việc lựa chọn cỏc loại thức ăn nhƣ mực, tụm ký cƣ và giun nhiều tơ trong thớ nghiệm dựa trờn:
- Nhu cầu dinh dƣỡng, loại thức ăn sử dụng trong nuụi thành thục tụm bố mẹ của tụm sỳ và tụm he núi chung đĩ đƣợc đề cập bởi Bray và cộng sự (1990) [40], Nguyễn Văn Chung (1997) [4], Treece (2001) [118], Wouter (2001) [133];
- Thành phần sinh húa của mực, tụm ký cƣ và giun nhiều tơ đĩ đƣợc thụng bỏo bởi Nguyễn Thanh Sơn (2007) và Tụn Thất Chất (2007) (trớch bởi [2]);
- Cỏc nghiờn cứu thực nghiệm và thực tiễn sản xuất giống tụm sỳ trong điều kiện Việt Nam của Đào Văn Trớ (2004) [24].
* Điều kiện thớ nghiệm:
- Tụm bố mẹ cú khối lƣợng và chiều dài trung bỡnh lần lƣợt là 52,2 2,8 g/con; 16,8 0,6cm, đƣợc đƣa vào thớ nghiệm cú sức khỏe tốt, buồng trứng chƣa phỏt triển.
- Số lƣợng cỏ thể theo dừi 30 con/bể 5,8 m3. Thớ nghiệm đƣợc lặp lại 3 lần. - Thớ nghiệm đƣợc bố trớ ở 3 cụng thức thức ăn khỏc nhau: Mực tƣơi; Mực tƣơi kết hợp giun nhiều tơ; Mực tƣơi kết hợp giun nhiều tơ và tụm kớ cƣ, với tỷ lệ là 2:1:1. Khẩu phần thức ăn chiếm 10-20% khối lƣợng thõn/ngày. Tụm đƣợc cho ăn 2 lần/ngày vào cỏc thời gian 8 giờ và 15 giờ. Tỷ lệ đực:cỏi là 1:1.
- Cỏc yếu tố khỏc đồng nhất: Nhiệt độ 27-30oC, độ mặn: 28-32‰, pH: 7,7- 8,4; cựng chế độ chăm súc và quản lý nhƣ nhau ở cỏc nghiệm thức.
* Bố trớ thớ nghiệm: Thớ nghiệm đƣợc tiến hành theo Hỡnh 2.4
Hỡnh 2.4: Ảnh hƣởng của loại thức ăn đến sự thành thục tụm chõn trắng
* Cỏc chỉ tiờu theo dừi:
- Theo dừi tỉ lệ thành thục (lờn trứng) và tỷ lệ tụm giao vĩ - Theo dừi sức sinh sản thực tế và tỷ lệ nở của trứng
Mực tƣơi (100%)
Mực tƣơi (50%) + giun nhiều tơ (50%)
Mực tƣơi (50%)+giun nhiều tơ (25%) + tụm kớ cƣ (25%)
- Thớ nghiệm đƣợc lặp lại 3 lần
- Số lƣợng tụm/bể: 30 con (W= 52,2 2,8 g/con; BL=16,8 0,6cm)
- Nhiệt độ 27-30oC, độ mặn: 28-32‰, pH: 7,7- 8,4; cựng chế độ chăm súc và quản lý.
- Theo dừi tỷ lệ thành thục và tỷ lệ tụm giao vĩ - Theo dừi sức sinh sản thực tế và tỉ lệ nở của trứng
Tụm thành thục sinh dục và cho đẻ Tụm bố mẹ đƣa vào nuụi vỗ, thuần dƣỡng
2.3.2.2. Nghiờn cứu ảnh hưởng của việc cắt mắt đến sự thành thục của tụm cỏi
* Điều kiện thớ nghiệm:
- Tụm mẹ tuyển chọn cú sức khỏe tốt, buồng trứng chƣa phỏt triển, đƣợc chia thành 06 nhúm kớch thƣớc khỏc nhau: 26-30, 31-35, 36- 40, 41-55, 46-50 và 51-60 g/con tụm mẹ. Mỗi nhúm kớch thƣớc đƣợc chia thành hai nghiệm thức: cú cắt một bờn cuống mắt và khụng cắt cuống mắt và đƣợc nuụi riờng từng bể xi-măng cú thể tớch 5,8 m3, mỗi bể 30 con. Thớ nghiệm đƣợc lặp lại 3 lần.
- Tụm cỏi đƣợc cắt cuống mắt bằng phƣơng phỏp thắt chỉ ở cuống mắt.
- Tiờu chuẩn tuyển chọn tụm cỏi, kỹ thuật cắt cuống mắt, điều kiện nuụi vỗ thành thục (nhiệt độ 27–30oC, pH 7,7– 8,4, độ mặn 28–32 ‰) và chế độ quản lý chăm súc đƣợc thực hiện nhƣ nhau cho cỏc bể thớ nghiệm.
- Thức ăn sử dụng gồm: Mực (50%), tụm ký cƣ (25%) và giun nhiều tơ (25%), với khẩu phần ăn chiếm 10-20% khối lƣợng thõn/ngày. Tụm đƣợc cho ăn 3 lần/ngày vào 6 giờ, 17 giờ và 21 giờ hàng ngày.
* Bố trớ thớ nghiệm: Thớ nghiệm đƣợc tiến hành theo Hỡnh 2.5
Hỡnh 2.5: Ảnh hƣởng của việc cắt mắt đến sự thành thục tụm chõn trắng
* Cỏc chỉ tiờu theo dừi:
- Theo dừi thời gian và tỉ lệ thành thục (lờn trứng) của tụm.
- Quỏ trỡnh phỏt triển buồng trứng đƣợc kiểm tra hàng ngày vào lỳc 17 giờ Số tụm cỏi đĩ đƣợc tuyển chọn Cắt mắt Khụng cắt mắt Cắt mắt Khụng cắt mắt Cắt mắt Khụng cắt mắt Cắt mắt Khụng cắt mắt Cắt mắt Khụng cắt mắt Cắt mắt Khụng cắt mắt Cỡ tụm 26-30g/con Cỡ tụm 31-35 g/con Cỡ tụm 36-40 g/con Cỡ tụm 41-45 g/con Cỡ tụm 46-50 g/con Cỡ tụm 51-60 g/con
- Tụm cỏi đƣợc cắt cuống mắt bằng cỏch thắt chỉ ở cuống mắt. - Số lƣợng tụm/bể: 30 con. Thớ nghiệm đƣợc lặp lại 3 lần
- Nhiệt độ 27-30oC, độ mặn: 28-32‰, pH: 7,7- 8,4; cựng chế độ chăm súc và quản lý.
- Theo dừi thời gian và tỷ lệ thành thục và tỷ lệ tụm giao vĩ trong cỏc nghiệm thức - Theo dừi quỏ trỡnh phỏt triển của buồng trứng, sức sinh sản thực tế, tỉ lệ nở của trứng
2.3.2.3. Nghiờn cứu ảnh hưởng của nhiệt độ, độ mặn đến hoạt động giao vĩ và nở trứng của tụm bố mẹ
* Điều kiện thớ nghiệm:
- Tụm bố mẹ tuyển chọn cú sức khỏe tốt, buồng trứng/tỳi tinh chƣa phỏt triển, đƣợc nuụi trong bể xi-măng cú thể tớch 5,8m3
, mỗi bể 30 con cho mỗi lụ thớ nghiệm. Tỷ lệ đực:cỏi là 1:1. Thớ nghiệm đƣợc lặp lại 3 lần.
- Thớ nghiệm đƣợc bố trớ ở cỏc thang nhiệt độ và độ mặn khỏc nhau. Cụ thể, nhiệt độ: 23-24oC, 25- 260C, 27-280C, 29-300C; Độ mặn: 25-26, 27-28, 29-30, 31- 32‰. Nhiệt độ nƣớc trong cỏc thớ nghiệm đƣợc điều chỉnh bằng heater nõng nhiệt; Độ mặn đƣợc điều chỉnh bằng cỏch pha đấu theo tỷ lệ về thể tớch nƣớc giữa 2 thang độ mặn pha đấu. Xỏc định lại độ mặn bằng khỳc xạ kế. Tồn bộ hệ thống thớ nghiệm đƣợc đặt trong một phũng kớn cú điều hũa nhiệt độ.
- Thức ăn sử dụng gồm: Mực (50%), tụm ký cƣ (25%) và giun nhiều tơ (25%), với khẩu phần ăn chiếm 10-20% khối lƣợng thõn/ngày. Tụm đƣợc cho ăn 3 lần/ngày vào 6 giờ, 17 giờ và 21 giờ hàng ngày. Cỏc yếu tố khỏc và chế độ chăm súc, quản lý nhƣ nhau ở cỏc lụ thớ nghiệm.
* Bố trớ thớ nghiệm: Đƣợc thể hiện nhƣ Hỡnh 2.6
Hỡnh 2.6: Ảnh hƣởng nhiệt độ, độ mặn đến hoạt động giao vĩ và nở trứng
* Cỏc chỉ tiờu theo dừi:
- Theo dừi tỷ lệ tụm giao vĩ thành cụng thụng qua việc xỏc định tỳi tinh của con đực gắn vào giữa đụi chõn bũ thứ ba đến thứ năm của con cỏi.
Tụm chõn trắng bố mẹ (W=53,1 0,9g/con)
Ảnh hƣởng của nhiệt độ
đến hoạt động giao vĩ và nở trứng đến hoạt động giao vĩ và nở trứng Ảnh hƣởng của độ mặn
Tỷ lệ tụm giao vĩ Sức sinh sản thực tế Tỉ lệ nở của trứng thụ tinh
- Xỏc định sức sinh sản thực tế của tụm (số lƣợng trứng/cỏ thể tụm mẹ/lần đẻ) và tỷ lệ nở của trứng (tổng số Nauplii/ tổng số trứng đĩ thụ tinh)
2.3.2.4. Nghiờn cứu ảnh hưởng của kớch cỡ đến sự thành thục và đẻ trứng của tụm chõn trắng.
* Điều kiện thớ nghiệm:
- Tụm cỏi tuyển chọn thớ nghiệm cú sức khỏe tốt và chƣa phỏt triển buồng trứng, đƣợc phõn chia thành ba nhúm kớch thƣớc: 35-40g/con, 41-45g/con và 46-50 g/con. Mỗi nhúm kớch thƣớc gồm 30 cỏ thể và đƣợc nuụi riờng trong từng bể xi-măng cú thể tớch 5,8 m3.
- Điều kiện nuụi vỗ: Nhiệt độ 27–30oC, pH 7,7– 8,4, độ mặn 28–32 ‰ và chế độ quản lý chăm súc đƣợc thực hiện nhƣ nhau cho cỏc bể thớ nghiệm.
- Thức ăn sử dụng gồm: Mực (50%), tụm ký cƣ (25%) và giun nhiều tơ (25%), với khẩu phần ăn chiếm 10-20% khối lƣợng thõn/ngày. Tụm đƣợc cho ăn 3 lần/ngày vào 6 giờ, 17 giờ và 21 giờ hàng ngày.
* Bố trớ thớ nghiệm: Theo sơ đồ Hỡnh 2.7
Hỡnh 2.7: Thớ nghiệm xỏc định ảnh hƣởng của kớch cỡ đến sự thành thục và đẻ trứng của tụm chõn trắng(số liệu trỡnh bày là giỏ trị trung bỡnh ± độ lệch
chuẩn) Tụm cỏi đĩ đƣợc tuyển chọn Nhúm tụm 35-40g/con (W=37,7 2,1g/con; BL=14,3 0,8 cm) Nhúm tụm 41-45 g/con (W=42,3 1,5g/con; BL=14,7 0,2 cm) Nhúm tụm 46-50 g/con (W=49,7 2,6g/con; BL=15,7 0,4 cm)
- Mỗi nhúm kớch thƣớc cú 30 con tụm; chăm súc, quản lý nhƣ nhau. - Theo dừi quỏ trỡnh phỏt triển của buồng trứng;
- Cho tụm đẻ để xỏc định cỏc chỉ tiờu sinh học sinh sản
* Chỉ tiờu theo dừi: Xỏc địnhtỷ lệ giao vĩ, thành thục và đẻ trứng ở cỏc nhúm kớch thƣớc; Tỷ lệ thụ tinh, tỷ lệ nở của trứng và tỷ lệ sống từ Nauplii đến giai đoạn Zoea; Thời gian giữa 2 lần lột xỏc, thời gian giữa 2 lần đẻ và thời gian từ khi cắt mắt đến lần đẻ đầu tiờn.
2.3.2.5. Nghiờn cứu ảnh hưởng của nhiệt độ, độ mặn đến sự phỏt triển và tỷ lệ sống của ấu trựng tụm chõn trắng.
* Điều kiện thớ nghiệm:
- Nguồn nƣớc mặn đƣợc bơm trực tiếp từ biển qua hệ thống lắng, lọc và xử lý trƣớc khi đƣa vào bể nuụi. Nhiệt độ nƣớc 27-29oC, độ mặn 28-32%0, pH từ 7,7-8,4.
- Nauplii tụm chõn trắng đƣợc thu từ tụm bố mẹ cho đẻ của Viện NCNT TS III, bố trớ thớ nghiệm từ Nauplii 4-5 khoẻ mạnh và cú cựng một nguồn.
- Thớ nghiệm đƣợc bố trớ trong bể composite cú thể tớch 300 lớt.
- Chế độ cho ăn, chăm súc và quản lý trong quỏ trỡnh ƣơng nuụi ấu trựng là nhƣ nhau. Mỗi lụ thớ nghiệm đƣợc lặp lại 3 lần.
* Bố trớ thớ nghiệm: Đƣợc thể hiện nhƣ Hỡnh 2.8
Hỡnh 2.8: Ảnh hƣởng nhiệt độ, độ mặn đến thời gian biến thỏi và tỷ lệ sống của ấu trựng tụm chõn trắng
* Cỏc chỉ tiờu theo dừi:
- Thời gian biến thỏi của ấu trựng tụm chõn trắng - Tỷ lệ sống của ấu trựng tụm chõn trắng
Ấu trựng Nauplii 4-5 tụm chõn trắng khỏe mạnh Ảnh hƣởng của nhiệt độ đến thời
gian biến thỏi và tỉ lệ sống ấu trựng
Ảnh hƣởng của độ mặn đến thời gian biến thỏi và tỉ lệ sống ấu trựng
Tỷ lệ sống của ấu trựng
Thời gian biến thỏi của ấu trựng
2.3.2.6. Nghiờn cứu ảnh hưởng của loại thức ăn đến sự sinh trưởng và tỷ lệ sống của ấu trựng tụm chõn trắng
Việc lựa chọn cỏc loại thức ăn trong thớ nghiệm dựa trờn:
- Nhu cầu dinh dƣỡng, thành phần sinh húa cỏc loại thức ăn sử dụng trong ƣơng nuụi ấu trựng tụm sỳ và tụm he núi chung đĩ đƣợc đề cập bởi cỏc tỏc giả Simon (1978), Quinitio và Villegas (1982), Aujero và cộng sự (1983), Liao và cộng sự (1983), McVey và Fox (1983), Liao (1984, 1986), Wilkenfeld và cộng sự (1984), Kungvankij và cộng sự (1986) (trớch bởi [101]; Brito và cộng sự (2001) [42]; Velasco và cộng sự (2000) [123]; Mayra và cộng sự (2002) [83]; Coutteau và cộng sự (1996) [53]; Kontara và cộng sự (1997) [69]; Gong và cộng sự (2000) [64];
- Thực tiễn sản xuất giống tụm sỳ trong điều kiện Việt Nam.
* Điều kiện thớ nghiệm: Tƣơng tự nhƣ mục 2.3.2.5, tuy nhiờnthớ nghiệm đƣợc bố trớ ở hai dạng bể khỏc nhau: Bể composite cú thể tớch 300 lớt (0,8 x 0,8 x 0,8 m) và bể xi-măng cú thể tớch 5,8 m3 (2,2 x 2,2 x 1,2 m).
* Bố trớ thớ nghiệm: Đƣợc thể hiện nhƣ Hỡnh 2.9
Nghiệm thức A- A: thức ăn tảo tươi (Chaetoceros sp., Skeletonema costatum)+thức ăn tổng hợp (Lansy+Frippak); Nghiệm thức B- B: thức ăn tảo khụ (Spirulina) + thức ăn tổng hợp
(Lansy+Frippak); Nghiệm thức C- C: thức ăn tảo khụ (Spirulina sp.)
Hỡnh 2.9: Ảnh hƣởng thức ăn đến thời gian biến thỏi và tỷ lệ sống của ấu trựng tụm chõn trắng
Ảnh hƣởng của cỏc loại thức ăn khỏc nhau đến sự phỏt triển của ấu trựng (giai đoạn Zoea, Mysis)
Chuẩn bị điều kiện và cho Nauplii vào thớ nghiệm
Nauplii tụm khỏe Nƣớc đủ tiờu chuẩn thớ nghiệm
Xỏc định loại thức ăn thớch hợp cho sự tăng trƣởng và phỏt triển của ấu trựng tụm chõn trắng
+ Trờn bể composite 300 lớt
- Mật độ Nauplii nuụi: Đợt 1: 120 con/lớt; Đợt 2: 140 con/lớt; Đợt 3: 200 con/lớt; - Bố trớ sử dụng cỏc loại thức ăn khỏc nhau (A - Tảo tƣơi+Lansy+Frippak; B - Tảo khụ+Lansy+Frippak; C - Tảo khụ) ở giai đoạn Zoea và Mysis theo sơ đồ và liều lƣợng thể hiện ở Hỡnh 2.9;Bảng 2.1.
Bảng 2.1: Chế độ cho ăn của ấu trựng tụm chõn trắng nuụi trong bể composit 300 lớt với cỏc nghiệm thức thức ăn khỏc nhau
Chỉ tiờu Lụ A Lụ B Lụ C Tảo tƣơi (vạn tb/ml) Lansy+Frippak (mg/l) Tảo khụ (mg/l) Lansy+Frippak (mg/l) Tảo khụ (mg/l) Zoea Mysis 4 – 20 3 – 10 1,2 – 1,6 2,2 – 2,8 0,6 – 0,8 1,1 – 1,4 0,6 – 0,8 1,1 – 1,8 1,2 – 1,6 2,2 – 2,8 + Trờn bể xi-măng 5,8m3
- Mật độ Nauplii thả nuụi: 90 con/lớt; thực nghiệm đƣợc tiến hành trờn 3 đợt,