Tất cả các nguyên vật liệu đều được cung cấp bởi bộ môn Công nghệ Sinh học Phân tử và Môi trường, trường Đại học Khoa học Tự nhiên, Đại học Quốc gia Thành phố Hồ Chí Minh.
a. Chủng vi sinh vật
- Chủng Escherichia coli DH5 {F- endA1 hsdR17 (rk-/mk-) supE44 thi - recA1 gyrA96 lacU169 (80 lacZ M15)} dùng để dòng hóa.
- Chủng chủ Escherichia coli Origami (DE3) [F-ompT hsdSB(rB- mB-) gal dcm lacY1 ahpC (DE3) gor522: Tn10 trxB (KanR, TetR)] dùng để biểu hiện vector tái tổ hợp mang gen mục tiêu.
b. Plasmid
- Plasmid phIGF1 có chứa trình tự gene higf-1 mã hóa cho hIGF-1, dùng để thu nhận gene higf-1 bằng phản ứng PCR.
- Plasmid pET-22b (Novagen) mang gene kháng kháng sinh ampicillin, có vùng MCS, trình tự khởi đầu sao chép, T7 promoter, T7 terminator và lac operator.
c. Dòng tế bào MCF-7 (ATCC)
Được sử dụng để kiểm tra hoạt tính protein hIGF-1. Đây là dòng tế bào ung thư vú có biểu hiện các thụ thể của hIGF-1 trên bề mặt tế bào. hIGF-1 có khả năng kích thích dòng tế bào này tăng sinh.
d. Các thang chuẩn
Hình 2.2. Thang chuẩn protein và DNA
e. Các vật liệu khác
- Mồi: T7 pro/T7 ter, 5’-NdeI-higf1/3’-BamHI-higf1 đặc hiệu cho gen higf-1
được thiết kế bởi Bộ môn Công nghệ Sinh học Phân tử & Môi trường, trường ĐH Khoa học Tự nhiên, ĐHQG TP. HCM và đặt tổng hợp tại công ty IDT (Hoa Kỳ).
- Màng lai Hybond ECL (nitrocellulose), HyperfilmTM ECL (Amersham Biosciences).
- Kháng thể đơn dòng kháng hIGF-1 (R&D system, Hoa Kỳ)
- Kháng thể thứ cấp kháng IgG chuột có đánh dấu Horseradish peroxidase (Piera, India).