Cordyceps militaris.
Phương pháp nhân giống cấp 1:
Cấy giống vào môi trường nghiên cứu bằng phương pháp cấy chấm đi m và đưa đi nuôi ở đi u kiện khác nhau trong 7,10,15 ngày, không có ánh sáng.
Phương pháp cấy chấm đi m được thực hiện như sau: d ng pank lấy một lượng t sợi nấm từ nh ng đĩa peptri đã được phân lập ở trên cấy vào môi trường đã chuẩn bị. Trên mỗi đĩa petri có ghi tên m u và ngày nhân giống. Sau khi cấy, d ng parafilm hàn k n miệng đĩa đ gi m u luôn trong đi u kiện vô tr ng.
Sau 7,10,15 ngày tiến hành chọn các chủng giống có hệ sợi đ u đẹp khuẩn lạc đạt đường kính 20mm trở lên, hệ sợi có màu tr ng, phát tri n đồng đ u v đường kính khuẩn lạc đ làm vật liệu cho quá trình nhân giống cấp 2.
2.3.3.1. Nhân giống cấp 1 trên môi trường thạch
a) Nghiên cứu ảnh hƣởng của thành phần môi trƣờng đến khảnăng sinh trƣởng của hệ sợi
Tiến hành cấy chấm đi m các m u trên 3 môi trường khác nhau: PDA, Hansen, Czapek-Dox, đi u chỉnh pH bằng 7, nuôi cấy ở 25oC, độ ẩm 80%, không chiếu sáng. Theo dõi sựsinh trưởng của hệ sợi thông qua việc đo khuẩn lạc các m u sau 7, 10, 15 ngày.
b) Nghiên cứu ảnh hƣởng của nhiệt độđến khảnăng sinh trƣởng hệ sợi
Nhiệt độ là một trong các đi u kiện môi trường quan trọng ảnh hưởng đến sinh trưởng của vi sinh vật. Thí nghiệm tiến hành nuôi cấy nấm trong các thang nhiệt độ khác nhau 20oC, 25oC và 30oC. Tiến hành cấy chấm đi m các m u nấm
Cordyceps militaris, đem nuôi ở các thang nhiệt độ khác nhau, c ng đi u kiện độ ẩm và ánh sáng. Xác định sựsinh trưởng của hệ sợi thông qua việc đo đường kính sinh trưởng của khuẩn lạc sau 7, 10, 15 ngày.
2.3.3.2. Nhân giống cấp 2 trên môi trường lỏng
a) Nghiên cứu ảnh hưởng của thành phần môi trường đến khả năng tạo sinh khối nấm trong môi trường dịch lỏng
Vật liệu nuôi cấy là hệ sợi nấm thu được từ các thí nghiệm trên. Thí nghiệm được bố trí với các công thức môi trường khác nhau kí hiệu l n lượt là:
M1: 20g/l Glucose + 0,1g/l MgSO4.7H2O + 0,1g/l KH2PO4 + 5g/l cao nấm men + 3g/l Pepton
M2: 20g/l Glucose + 0,1g/l MgSO4.7H2O + 0,1g/l KH2PO4 + 5g/l cao nấm men + 5g/l Pepton
M3: 20g/l Glucose + 0,1g/l MgSO4.7H2O + 0,1g/l KH2PO4 + 5g/l cao nấm men + 7g/l Pepton
Tiến hành nuôi l c ở tốc độ 150 v ng/phút, c ng đi u kiện nhiệt độ, độ ẩm. Sau 7 ngày nuôi l c dịch, quan sát đặc đi m hệ sợi nấm và thu thập số liệu.
b) Nghiên cứu ảnh hưởng của tốc độ lắc đến khảnăng tạo sinh khối nấm
trong môi trường dịch lỏng
Vật liệu nuôi cấy là hệ sợi nấm thu được từ các thí nghiệm trên. Môi trường nuôi cấy là s dụng môi trường vừa nghiên cứu ở thí trên. Thí nghiệm được bố trí trong c ng đi u kiện nhiệt độ, độẩm, và tốc độ l c thay đổi từ 100 - 200 vòng/phút. Sau 7 ngày nuôi l c dịch, quan sát đặc đi m hệ sợi nấm và thu thập số liệu.