Nguyên tắc: phương pháp này xác định tác động của các hoạt chất thử nghiệm
lên dòng tế bào quan tâm thông qua việc xác định số lượng tế bào còn tồn tại trong
giếng khi có và không có hoạt chất nhờ thuốc nhuộm trypan blue. Nguyên tắc chính
của phương pháp là phân biệt tế bào sống và chết dưới kính hiển vi nhờ sự phản ứng
khác biệt đối với thuốc nhuộm. Do trypan blue chỉ có thể đi xuyên qua màng tế bào chết, nên sau khi nhuộm, tế bào sống không bắt màu thuốc nhuộm sẽ nhỏ, tròn và khúc xạ, còn tế bào chết sẽ phồng to lên và có màu xanh đen của trypan blue. Tế bào sau khi
được tách bằng trypsin, sẽ được nhuộm và đếm bằng buồng đếm hồng cầu dưới kính
hiển vi quang học. Qui trình thực hiện như sau:
Thực hiện tạo dịch huyền phù tế bào có mật độ khoảng 105 – 106 như khi khảo sát đường cong tăng trưởng.
Cấy vào mỗi giếng 150µl dịch huyền phù tế bào, đặt đĩa vào tủ nuôi 370C, 5% CO2 cho các tế bào ổn định.
Sau khi nuôi ổn định 2 ngày, thay môi trường cũ bằng môi trường mới có chứa
sản phẩm theo các nồng độ 0.005, 0.010, 0.015, 0.020, 0.025 mg/ml.
Sau mỗi 24h, 48h, 72h, 96h, 120h khảo sát, tách tế bào trong các giếng tương ứng của thời điểm khảo sát đó bằng trypsin – EDTA 0,25%. Nhuộm tế bào với
thuốc nhuộm trypan blue, và đếm bằng buồng đếm Neubauer dưới kính hiển
Đếm tất cả các tế bào sống có trong 5 ô lớn của buồng đếm, sau đó lấy trung bình của 5 ô (A). Mỗi giá trị trung bình này được tính cho một lần thí nghiệm, thí nghiệm được lặp lại 15 lần.
Lô đối chứng cũng được thực hiện tương tự với môi trường chứa dung môi hòa tan cao chiết (DMSO).
Số tế bào (N) trong 1ml mẫu (cũng là trong 1 ô lớn):
N = 2 x A x 104
Khả năng giết chết tế bào ung thư của sản phẩmđược tính theo công thức:
H(%) = [(TĐC – TKS)/ TĐC] x 100%
H: tỷ lệ gây chết tế bào ung thư
TĐC: mật độ tế bào của lô đối chứng
TKS: mật độ tế bào của lô khảo sát