Các chủng vi khuẩn được phân lập từ các mẫu bệnh phẩm ở hai bệnh viện tại TP. HCM (bệnh viện Chợ Rẫy và bệnh viện Thống Nhất) từ tháng 3 đến tháng 6 năm 2010 theo quy trình xét nghiệm tại mỗi bệnh viện. Các chủng vi khuẩn được phân lập, định danh và thử nghiệm kháng sinh đồ. Dựa trên kết quả kháng sinh đồ của bệnh viện, các chủng vi khuẩn có đường kính vòng kháng khuẩn < 22 mm trên ceftazidim 30 µg, cho thấy có sự giảm nhạy cảm với kháng sinh cephalosporin thế hệ 3. Các chủng này nghi ngờ có khả năng sinh ESBL được thu thập lại. Chúng tôi chỉ đưa vào nghiên cứu các chủng có kết quả định danh rõ ràng và thử nghiệm đĩa đôi dương tính với kiểu hình ESBL khi được thực hiện lại tại phòng thí nghiệm vi sinh của OUCRU.
Nghiên cứu này thực hiện trên 32 chủng vi khuẩn Gram âm sinh ESBL, trong đó, 23 chủng E. coli (21 chủng phân lập được tại bệnh viện Chợ Rẫy và 2 chủng tại bệnh viện Thống Nhất), 9 chủng K. pneumoniae (3 chủng tại bệnh viện Chợ Rẫy và 6 chủng tại bệnh viện Thống Nhất).
Sơđồ 2.1 Quy trình thực nghiệm Mẫu bệnh phẩm
Tên vi khuẩn
Vi khuẩn thuần Thử nghiệm sinh hóa Định danh
Xác định kiểu hình ESBL
Xác định MIC của các chủng sinh ESBL
E-test
Xác định kiểu gen ESBL
Xác định các gen mã hóa ESBL bằng các mồi đặc hiệu
Xác định trình tự gen mã hóa ESBL
PCR
Giải trình tự DNA
Phân tích plasmid các chủng sinh ESBL
Kích thước và số lượng các plasmid
Xác định các plasmid mang gen đề kháng
Xác định khả năng truyền các gen đề kháng giữa các vi khuẩn
Điện di trên gel
agarrose
Southern Blot